红车轴草总异黄酮粉剂中总异黄酮含量测定研究

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1、红车轴草总异黄酮粉剂中总异黄酮含量测定研究朱贤森黄志勤杨庆春齐来【摘要】目的建立红车轴草总异黄酮粉剂中总异黄酮含量的测定方法，从而对该品进行质量控制。方法采用紫外分光光度法直接测定粉剂中总异黄酮含量，测定波长为250nm。结果回归方程为：Y＝0.1312X＋0.0095，相关系数r＝0.9997，平均回收率为98.3%，RSD为2.06%，线性范围为1.0040～5.0200mg/ml。结论紫外分光光度法测定该粉剂中总异黄酮含量结果准确、方便、快捷、重现性好。【关键词】紫外分光光度法红车轴草粉剂总异黄

2、酮　　Abstract：ObjectiveToestablishthedeterminationmethodofcontentofisoflavonesinTrifoliumpratenseFenjibyUVspectromertryandcontrolthequality.MethodsThecontentofisoflavonesinedbymeasuringtheUVabsorbanceat250nm..ResultsThelinearrelationshipg/ml.ConclusionIti

3、sspecific，accurate，convenientandrapidformeasuringthecontentofisoflavones.　　Keyertry;TrifoliumpratenseFenji;Isoflavones;DeterminationofConcentration　　中药红车轴草TrifoliumpratenseL.为豆科车轴草属多年生草本植物的干燥花序及带花枝叶,又名红三叶红花苜蓿三叶草等〔1〕，在我国大部分地区均有生产，主要含有蛋白质、氨基酸、糖类、维生素和异黄酮等成

4、分，其中异黄酮具有抗肿瘤（胃癌、乳腺癌）和治疗骨质疏松、更年期综合征〔2〕、抑制前列腺癌和骨髓白血病细胞的生长、改善动脉血管的柔顺性〔3〕等多种功能。随着对研究的深入，目前国内外科学家已从红车轴草中发现了四十多种异黄酮类化合物，主要是大豆黄素、染料木素、刺芒柄花素和鹰嘴豆芽素A等及其相应的苷类。目前关于红车轴草及其提取物中异黄酮报道较少，大多只测定了刺芒柄花素和鹰嘴豆芽素A。红车轴草总异黄酮粉剂由中药材红车轴草经现代制药工艺提取、浓缩、干燥、粉碎而成。本文对该粉剂中总异黄酮的含量测定进行了相关研究。　

5、　1仪器与试药　　紫外可见分光光度计：UV2450PC（日本岛津公司）；红车轴药材购自广东清远药材市场，红车轴草总异黄酮粉剂由实验室自制，芒柄花素对照品由中国药品生物制品检定所提供。甲醇（色谱纯），水（重蒸水），其他试剂均为分析纯。　　2方法与结果　　2.1样品的制备取红车轴草药材，粉碎成粗粉，加85%甲醇浸泡2h后回流提取两次，2h/次。将提取液吸入减压浓缩罐中，减压回收至相对密度1.05～1.10（50℃）。浓缩液冷却后静置分层，倾出上层药液，下层沉淀待处理；上层药液加5倍量水，搅拌30min后离

6、心处理。离心后所得沉淀与上述浓缩液下层沉淀合并，加6倍量溶剂于室温下脱脂3次，每次搅拌30min后静置1h，吸除上层溶剂，下层脱脂沉淀物60℃真空干燥后用醋酸乙酯乙醇混合溶剂加热回流提取2h，冷至室温后滤过，滤液减压浓缩至所加混合溶剂体积的1/12，冷至室温后再静置8h，滤过，沉淀物60℃真空干燥，粉碎，将样品用甲醇配成适当浓度溶液即得。　　2.2测定方法的选择根据化学成分研究结果，红车轴草含有黄酮类成分、蛋白质、糖类、脂溶性色素和少量的甾醇类等成分，本品经纯化后，主要含芒柄花素、鹰嘴豆芽素A等异黄

7、酮类化合物及少量的脂溶性色素成分。这些异黄酮类化合物在紫外区具有很强的特征吸收，因此选择紫外分光光度法测定本品总黄酮的含量。　　2.3对照品的选择根据化学成分研究结果，芒柄花素（formonoin）是本品含量最高的成分，因此选择芒柄花素作为本品含量测定的对照品。　　2.4测定波长的选择将样品和芒柄花素对照品用甲醇配成适当浓度，在200～400nm范围内扫描，两者最大吸收波长均在250nm，因此选择250nm作为本品的测定波长。　　2.5线性关系和回归方程精密称取芒柄花素对照品10mg，置10ml量瓶中

8、，加适量的甲醇溶解并稀释至刻度。精密吸取该溶液0.5ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得每毫升含0.05mg的芒柄花素对照品溶液。准确吸取芒柄花素对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分别置于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，以甲醇为空白对照，于250nm波长处测定吸收值。以吸收度为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线。其线性关系和回归方程为：Y＝0.1312X＋0.0095，相关系数r＝0.9997，线性范围为1.0040