红车轴草总异黄酮正交提取工艺和大孔树脂吸附分离性能的研究论文

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1、红车轴草总异黄酮正交提取工艺和大孔树脂吸附分离性能的研究论文【摘要】目的以红车轴草总异黄酮为目的物，筛选最佳提取条件和吸附树脂。方法采用单因素和正交实验法筛选最佳提取工艺，采用静态吸附脱附法筛选最佳树脂。结果红车轴草总异黄酮最佳提取工艺为：提取温度为80℃，提取时间为1h，料液比为1∶12，碱水pH为11，提取2次，树脂D103是有较好的吸附脱附效果。结论采用此法可较好地提取、富集、纯化红车轴草总黄酮。【关键词】红车轴草;总异黄酮;正交实验;D103大孔树脂红车轴草TrifoliumpratenseL.为豆科多年生草本植物.freela公司;大孔树脂D101，D102，D103，D104，

2、购自天津市大钧科技开发有限公司。试剂为分析纯。1.3仪器电热恒温水浴锅(H·H·S21-6C，上海医疗器械五厂);电子分析天平(FC204，上海精科实业有限公司);UV-762紫外分光光度计(上海精密科学仪器有限公司);旋转蒸发器(上海亚蓉生化仪器厂);SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵，索式提取器，电热鼓风干燥箱;植物粉碎机(FZ102，天津市泰斯特仪器有限公司)。2方法2.1总异黄酮的含量测定2.1.1测定波长的选择将鹰嘴豆素对照品、红车轴草异黄酮提取液配成适当浓度，在200～400nm波长范围内进行光谱扫描，二者吸收曲线类似，均在258nm处有最大吸收，故选择285nm为测定波长。2.1

3、.2对照品溶液的配置和标准曲线的制备精密称取干燥至恒重的鹰嘴豆芽素对照品4.0mg，置于50ml容量瓶中，加入95%的乙醇溶解，并定容至刻度，摇匀，即可。精密吸取0.0，0.3，0.6，0.9，1.2，1.8，2.4ml标准液，分别置于10ml容量瓶中，各自加入95%的乙醇1ml，加蒸馏水定容，摇匀，在波长258.5nm处测定吸收值。得回归方程为：C=0.00968A+0.00006，r=0.9991,.freell范围内，浓度与吸光度线性关系良好。2.1.3样品的含量测定按照标准曲线的方法，以鹰嘴豆芽素为对照品测定样品的含量。2.2红车轴草提取工艺效果的因素实验2.2.1单因素实验准确称

4、取0.30g红车轴草粉末置于微型回流装置中，在不同条件下提取以确定提取因素变化范围以及各因素的较佳值。通过测定提取液中总异黄酮含量，计算总异黄酮的提取率，以判断最佳条件。2.2.2正交工艺实验以水的pH、浸提温度、料液比和浸提时间4种因素作为参考对象，采用正交L9(34)，以获取最佳工艺参数。2.3大孔树脂静态吸附实验2.3.1饱和吸附量的测定准确称取经预处理的用滤纸吸干表面水分的树脂0.50g于50ml三角瓶中，精密加入1.06mg/ml的红车轴草总异黄酮溶液10.0ml，在25℃，180r/min的条件下振荡吸附24h。测定吸附后溶液中总异黄酮的量，并按下式计算树脂的饱和吸附量。饱和吸

5、附量=(加入的总异黄酮-未吸附的总异黄酮)/树脂的量2.3.2树脂脱附率的测定将上述经过24h静态吸附总异黄酮的树脂分离出来，吸干表面水分，然后加入70%的乙醇5.0ml，在25℃，180r/min的条件下振荡脱附2h。测定脱附液中总异黄酮的量，按下式计算脱附率。脱附率(%)=洗脱出的总异黄酮/(加入的总异黄酮-未吸附的总异黄酮)×100%3结果3.1单因素实验3.1.1水液pH对提取效果的影响异黄酮含有酚羟基，呈酸性，故选用碱性水做提取液。在60℃温度下，1∶16的料液比，搅拌提取1h时，水液pH对总异黄酮的提取效果见图1。从图1可以看出选择pH为11的水液做提取溶剂是最合适的。3.1.

6、2温度对提取效果的影响固定碱水pH为11，料液比为1∶16，提取1次，提取时间为1h，变化提取温度。温度对异黄酮提取效果见图2。图1碱水pH对总异黄酮提取率的影响图2温度对总异黄酮提取率的影响从图2可以看出随温度升高，总异黄酮的提取率增加，温度达到80～90℃时提取率差异不大，从成本和黄酮的热稳定性考虑，选择80℃左右的温度较佳。3.1.3料液比对提取效果的影响固定碱水pH为11，提取温度为80℃，提取时间1h，提取1次，改变料液比。不同料液比对总异黄酮提取效果见图3。图3料液比对总异黄酮提取率的影响从图3可以看出料液比为1∶20时总异黄酮提取率最高，但与料液比1∶16时差别很小，考虑后续

7、工艺处理成本，优选1∶16的料液比。3.1.4提取时间对提取效果的影响固定碱水pH为11，提取温度为80℃，料液比为1∶16，提取1次，改变提取时间。不同提取时间对总异黄酮提取效果见图4。图4时间对总异黄酮提取率的影响从图4可以看出随提取时间的延长，提取率增加，但在1h后提取率增加缓慢，延长提取时间会增加生产成本，故提取时间可以控制在1h内。3.1.5提取次数对提取效果的影响固定碱水pH为11，提取温度为80℃，提取1h