反相高效液相色谱法测定亳菊提取物中木犀草素及芹菜素的含量

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1、反相高效液相色谱法测定亳菊提取物中木犀草素及芹菜素的含量潘见　汪翔　杨毅　金日生【摘要】目的建立同时测定亳菊提取物中木犀草素及芹菜素的反相高效液相色谱检测方法。方法采用RestekPinnacleⅡC18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，配制流动相为甲醇∶四氢呋喃∶0.3%H3PO4水溶液=42∶13∶56，在流速为1.0ml/min，检测波长为350nm，柱温为室温，进样量为10μl的情况下建立测定方法。结果木犀草素线性范围为3.99～99.75μg/ml（r=0.9996），平均加样回收率为105.9%，RSD=1.5%；芹菜素线性范围为

2、4.095～102.375μg/ml（r=0.9996），平均加样回收率为103.7%，RSD=2.5%。结论用该方法测定亳菊提取物中木犀草素及芹菜素的含量，具有分析时间较短，分离度高的特点。【关键词】反相高效液相色谱法；木犀草素；芹菜素；亳菊提取物　　Abstract：ObjectiveTodevelopareversed-phasehighperformanceliquidchromatographicmethodforthesimultaneousdeterminationofluteolinandapigenininChrysanthemum

3、morifoliumextract.MethodsTheseparationn（250mm×4.6mm，5μm）obilephaseataflol/min.Theabsorbanceonitoredat350nm.Thevolumeofinjectionl～99.75μg/ml（r=0.9996）forluteolinand4.095μg/ml～102.375μg/ml（r=0.9996）forapigenin.Theaveragerecoveriesethodusedforthedeterminationofluteolinandapigenini

4、ntheChrysanthemummorifoliumextracthasthecharacteristicsofshortretentionandhighresolution.　　Keyummorifoliumextract中药菊花是菊科植物菊ChrysanthemummorifoliumRamat.的干燥头状花序〔1〕，是一种常用中药，具有疏风、清热、明目、解毒功效，临床上用于治疗高血压病和冠心病等〔2〕。亳菊主产于安徽亳州、涡阳一带〔3〕。菊花的有效部位主要有黄酮类、萜类、碳环芳香族酚酸类化合物（蒋惠娣．《中药杭白菊心血管系统作用及活性成分研究

5、》．2004浙江大学博士学位论文）〔4〕。亳菊提取物成分复杂，为控制其产品质量，依据菊花药效物质及药理作用，建议以绿原酸、木犀草素、芹菜素和总黄酮4个指标，构建质量评价体系。其中木犀草素具有消炎、抗过敏、抗肿瘤、抗菌、抗病毒、降低兔实验性动脉粥样硬化程度和降胆固醇等作用〔4，5〕；芹菜素具有抗肿瘤、抗炎、降血压和舒张血管、抗动脉硬化和血栓症、抗焦虑、抗菌、抗病毒等作用〔6〕。两者药理作用与亳菊的药理作用相近，且两者在亳菊提取物中含量较高。因此，建立同时测定木犀草素及芹菜素的HPLC测定方法，对亳菊提取物的质量标准研究及亳菊药材的质量控制具有重要的意义

6、。　　1仪器与试药poa.morifolium(Ramat.)Tzvel.cv.‘Boju’由安徽济人药业提供〕；亳菊提取物样品（农产品生物化工教育部工程研究中心研究制备）。　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱为RestekPinnacleⅡC18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇∶四氢呋喃∶0.3%H3PO4=42∶13∶56；流速1.0ml/min；检测波长350nm；柱温为室温；进样量10μl。　　2.2对照品储备液的制备精密称取木犀草素、芹菜素对照品适量，用甲醇溶解配制成含木犀草素为399μg/ml及芹菜素为409.5μg

7、/ml的对照品混合溶液。　　2.3供试品溶液的制备取亳菊提取物样品约75mg，精密称定置小烧杯中，用10ml甲醇超声溶解，转移至25ml容量瓶中并定容摇匀，取部分溶液离心（10000r/min，5min），取上清液即得供试品溶液。　　2.4标准曲线的绘制从对照品储备液中精密量取0.1，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5ml，分别置于10ml容量瓶中，甲醇定容，得到系列混合对照品溶液，各进样10μl，按照上述的色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，对照品浓度（μg/ml）为横坐标，绘制标准曲线，得木犀草素回归方程为Y=34778X-41681（r=0.9

8、996），线性范围为3.99～99.75μg/ml；芹菜素回归方程为Y=50871X-38471（r=0.9