高效液相色谱法测定金钱草颗粒中槲皮素和山奈素的含量论文

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1、高效液相色谱法测定金钱草颗粒中槲皮素和山奈素的含量论文.freel（200mm×4.6mm）柱，以甲醇0.4%磷酸溶液（45∶55）为流动相；流速：1.0mlmin1；检测波长为360nm。柱温：30℃。结果该法线性关系良好，槲皮素平均回收率为101.2%，RSD为1.14%；山奈素平均回收率为100.1%，RSD为1.33%。结论该方法简便、准确、重现性好，可用于该制剂的质量控制和评价。关键词：金钱草颗粒；槲皮素；山奈素；含量测定；高效液相色谱法DeterminationofQuercetinandKaempferolinHerbaLysimachiaeGranules

2、byHPLCAbstract：ObjectiveToestablishanHPLCmethodforthedeterminationofquercetinandkaempferolinHerbaLysimachiaeGranules.MethodsDalianEliteHypersilODS25μm（200mm×4.6mm）columnobilephaseethanol-0.4%phosphoricacidsolution(45∶55).Theflolmin1；Thedetection；Thecolumntemperatureferolethodissimple,accu

3、rateandachiaeGranules；Quercetin；Kaempferol；Determinatim；HPLC金钱草颗粒为单味药制剂，具有清利湿热，通淋消肿的功效。用于热淋.freelg，置100ml容量瓶中，加80%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每毫升含槲皮素101.2893μg）。精密称取山奈素对照品10.25mg，置100ml容量瓶中，加80%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每毫升含山奈素102.5μg）。作为对照品储备液。2.2样品溶液的制备取本品10袋的内容物，混匀，研细，精密称取1g，置锥形瓶中，精密加80%甲醇50ml，称定重量，超声30mi

4、n，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液25ml，精密加入盐酸5ml，置90℃水浴中加热水解1h，取出，迅速冷却，转移置50ml容量瓶中，用80%甲醇稀释置刻度，摇匀，即得。2.3色谱条件与系统适应性实验采用十八烷基硅烷键合硅胶填充色谱柱；以甲醇0.4%磷酸溶液（45∶55）为流动相；流速1.0mlmin1；检测波长为360nm。理论板数以槲皮素峰计算大于6000，主峰与相邻杂质峰之间的分离度大于1.5。结果见图1。2.4线性关系考察分别精密吸取槲皮素对照品储备液1.0ml，分别置10，25，50，100，200ml容量瓶中，各精密加入山奈素

5、对照品储备液5.0ml，加80%甲醇稀释至刻度，摇匀，制成系列混合对照品溶液。按上述色谱条件分别进样测定，以峰面积积分值A为纵坐标，以槲皮素和山奈素的浓度C（μgml1）为横坐标，其标准曲线回归方程和线性范围结果见表1。表1各组分的回归方程和线性范围回归方程（略）2.5精密度实验精密量取上述对照品溶液10μl，重复进样5次，按上述色谱条件测定，槲皮素和山奈素峰面积积分值的RSD分别为0.50%和0.61%。2.6重复性实验分别取同一批号（批号：040509）样品各5份，照2.2样品溶液的制备和测定方法进行测定，结果槲皮素的平均含量为0.042%，RSD为1.02%，山奈素

6、的平均含量为0.168%RSD为0.52%。2.7稳定性实验取同一批号的供试品溶液（批号：040509），每隔2h进样1次（10μl），共进样6次，按上述色谱条件分别测定，结果槲皮素和山奈素的RSD分别为1.24%和1.55%，表明供试品溶液在12h内稳定。2.8空白实验按处方比例及工艺，制备缺金钱草的阴性制剂，再按供试品溶液制备方法制备不含金钱草的阴性对照品溶液，进样10μl测定。结果阴性对照品溶液分别在与槲皮素和山奈素对照品相同保留时间位置未见有相同保留时间的吸收，说明辅料对本方法测定槲皮素和山奈素的含量无干扰。见图谱1-c。2.9加样回收率实验取已知含量的样品（批号

7、：040509）内容物适量，精密称定，分别精密加入槲皮素对照品溶液（101.2893μgml1）2.0ml和山奈素对照品溶液10.0ml，按照供试品溶液制备项下的方法制备，依法测定，计算回收率。结果见表2～3。表2槲皮素回收率测定结果（略）表3山奈素回收率测定结果样品重（略）2.10样品测定取3批样品，按上述测定方法进行测定，以外标峰面积法计算样品的含量，结果见表4。表4样品含量测定结果（略）3讨论3.1本实验样品溶液的制备是参照《中国药典》2005年版Ⅰ部金钱草含量测定项下供试品溶液制备的方法，因本样品为颗粒剂，因此把回流1