高效液相色谱法测定黄毛耳草中槲皮素的含量论文

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1、高效液相色谱法测定黄毛耳草中槲皮素的含量论文【关键词】高效液相色谱法摘要:目的建立黄毛耳草中槲皮素含量的测定方法。方法色谱柱:ODSKromasilC18色谱柱（4.6mm×150mm，5μm）；柱温：35℃;流动相：甲醇0.4%磷酸(体积比45∶55),流速：1.0mL/min,检测波长：365nm。结果槲皮素进样量在0.005～0.045μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9997),回收率99.88%,RSD0.58%。结论本法简便,结果可靠，可用于黄毛耳草及其制剂的质量控制。关键词:黄毛耳草;槲皮素;含量测定;高效液相

2、色谱法Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCmethodforcontentdeterminationofquercetininHedyotischrysoticha(Palib.)Merr.MethodsHPLCmethodasilC18columnusingmethanol0.4%phosphoricacid(45∶55)asthemobilephaseunderthedetection.ResultsThecalibrationcurveforquercetinethodissimple,co

3、nvenientandreliableforqualitycontrolofHedyotischrysoticha(Palib.)Merr.KeyasilC18色谱柱（4.6mm×150mm，5μm）；柱温：35℃;流动相：甲醇0.4%磷酸(体积比45∶55),流速：1.0mL/min,检测波长：365nm；进样量：5μL。理论塔板数不低于3000，分离度大于3.0。对照品与样品的色谱图见图1、图2。3方法学考察3.1对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品适量,加甲醇溶解,制成每1mL含桷皮素5μg的溶液，即得。3.2供试品溶液的制

4、备取本品粉末约1.5g,.freelL磨口圆底烧瓶中,精密加入5%(ω)硫酸乙醇25mL,称定重量。水浴回流2.5h,放冷,再称定重量,用95%(φ)乙醇补足减失的重量,滤过,取续滤液,即得。3.3线性范围将对照品溶液分别进样1、3、5、7、9μL,测定峰面积,以峰面积积分值（A）为纵坐标,槲皮素进样量（m）为横坐标绘制标准曲线,回归方程为:A=774.1m+0.36,r=0.9997。槲皮素在0.005～0045μg范围内与峰面积具有良好的线性关系。3.4精密度试验取同一浓度对照品溶液重复进样6次,槲皮素峰面积的RSD为1.07

5、%，表明精密度良好。3.5稳定性试验将样品溶液在室温下贮存,于0、2、4、8、12、24h测定,结果桷皮素峰面积RSD为1.52%，表明样品溶液在室温下放置24h内基本稳定。3.6加样回收率试验采用加样回收法，精密称取适量已知含量的同一批号样品6份，每份1g，分别精密加入槲皮素对照品溶液（0.20mg/mL）0.3mL、0.4mL、0.5mL，振摇混匀，按上述样品含量测定项下的供试品溶液配制方法操作，记录色谱图，以峰面积，按外标法计算，测定槲皮素含量，计算回收率和相对标准偏差，结果见表1。表1槲皮素加样回收率试验结果（略）3.7重

6、复性试验同一批样品分别称取5份,分别测定含量,结果桷皮素峰面积RSD为1.03%。3.8含量测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μL,注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件,以外标法计算含量。3批黄毛耳草药材槲皮素含量分别为:0.0817,0.0830,0.0795mg/g。4讨论4.1色谱条件的确定本实验用甲醇0.4%磷酸(体积比45∶55)可将槲皮素与其他峰分离,且流动相配比简单。在实验中曾考察了甲醇0.4%磷酸不同比例(体积比55∶45,50∶50,45∶55,40∶60)对槲皮素峰的影响,结果表明,流动相比例除对保留时间

7、有一定影响外,对槲皮素峰的分离和峰纯度无影响。4.2提取条件的选择在实验中比较了冷浸、冷浸后再超声、热回流提取等提取方法,结果表明热回流提取最好,因此选用热回流提取方法。并考察了提取时间的影响,结果回流2.5h提取率较高。4.3黄毛耳草的质量控制黄毛耳草因疗效独特而广泛应用于临床,然而其质量评价方法报道极少,因而本试验为黄毛耳草及其制剂的质量控制提供了分析方法。