高效液相色谱法测定蒙药黄花铁线莲中槲皮素的含量论文

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1、高效液相色谱法测定蒙药黄花铁线莲中槲皮素的含量论文常福厚齐君范蕾韩瑞兰王敏杰尹琴【摘要】目的测定黄花铁线莲中槲皮素的含量，为蒙药黄花铁线莲中槲皮素的含量提供检测方法，制定质控标准。方法采用高效液相色谱法，Kromasil(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，甲醇0.4%磷酸（60∶40）为流动相，流速为1.0ml/min；检测波长360nm。结果槲皮素浓度在15.35～76.75μg/ml范围之间与峰面积线性关系良好，r=0.9996。槲皮素平均回收率为98.13%.freelatisintricataBge.的地上部分，主要分布于内蒙古

2、、辽宁、河北、山西、陕西、甘肃、青海等地,多生于山坡、草地、路边或灌木丛中。“黄花铁线莲”名称源于其植物名，其作为蒙药“阿拉格-特木尔-敖日阳古”收载于《中华医学百科全书》（蒙医分卷）《认药白晶鉴》《无误蒙药鉴》《内蒙古中草药》和《内蒙古植物药志》［1］《中华本草》（蒙药卷）中。主治胃痞、石痞、大肠痞、食痞等寒性痞症。现有研究表明，槲皮素具有抗炎、抗氧化、抗癌和抗突变、抗心肌肥厚和降血压等多种药理作用［2～4］。黄花铁线莲有效成分为槲皮素等黄酮类物质，本实验采用高效液相色谱法测定其中槲皮素的含量，以此方法控制蒙药材黄花铁线莲的质量。1材料与仪器

3、1.1材料黄花铁线莲（采自内蒙古呼和浩特市蛮汉山、小井沟、五一水库，经内蒙古医学院药学院生药学教研室庞秀生教授鉴定为毛茛科植物黄花铁线莲ClematisintricataBge.的地上部分），方法学考察中均采用蛮汗山所采集到的样品。槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：100081-200406）；甲醇为色谱纯，无水乙醇、磷酸、盐酸等试剂均为分析纯，水为双蒸水。1.2仪器依利特UV-230+高效液相色谱仪(大连依利特分析仪器有限公司):UV-230+紫外-可见检测器、P230/P230p高压恒流泵、EC2000色谱工作站。601超极恒

4、温水浴（江苏省金坛市医疗仪器厂），电子天平（JA2003，上海天平仪器厂）。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：Kromasil(250mm×4.6mm，5μm),流动相：甲醇-0.4%磷酸（60∶40）；流速：1.0ml/min；检测波长：360nm；进样量为20μl。结果见图1～2。图1槲皮素对照品HPLC图谱图2黄花铁线莲HPLC图谱2.2对照品溶液的配制取120℃干燥4h的槲皮素对照品3mg，精密称定，置10ml容量瓶中，然后加甲醇至刻度，摇匀，即得（每毫升中含槲皮素0.307mg）。2.3供试品溶液的制备取本品1g，过65目筛，精密称定

5、，加无水乙醇16ml，9%盐酸4ml，加热回流两次，30min/次，抽滤，合并滤液，置50ml容量瓶中，加9%盐酸至刻度，摇匀，即得。2.4标准曲线的制备精密吸取0.5，1.0，1.5，2.0，2.5ml对照品溶液分别置于10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。分别吸取20μl注入高效液相色谱仪，记录峰面积。以对照品溶液浓度为横坐标，对照品峰面积为纵坐标，进行线性回归，标准线性回归方程为Y=89.644X-71.768，r=0.9996实验表明槲皮素浓度在15.35～76.75μg/ml范围内呈良好的线性关系。2.5精密度实验取供试品溶液，重复进

6、样5次，记录峰面积并计算，结果槲皮素的平均含量为1.8587mg/g，RSD为1.11%。2.6稳定性实验取黄花铁线莲供试品溶液在0，1，2，3，4，5，6，9h分别进样20μl，记录峰面积，结果RSD为1.05%，表明槲皮素在9h内保持稳定。2.7重复性实验取同一批供试品5份，各约1g,精密称定，分别按样品提取方法提取、测定，结果槲皮素品均含量为1.832mg/g，RSD为1.81%。2.8加样回收率实验取已知含量的同一批供试品5份，各约0.5g，精密称定，分别加入槲皮素标准品溶液（0.586mg/ml）1.45ml，按供试品溶液的方法处理并

7、测定含量，计算加样回收率，结果见表1。槲皮素平均回收率为98.13%，RSD为1.55%,结果表明本方法准确可靠。表1样品中槲皮素含量加样回收率实验结果2.9样品含量测定取3个批次的样品各两份，每份约10g，精密称定，按“供试品溶液的制备”项下操作，取20μl注入高效色谱仪，以色谱条件测定，计算槲皮素的含量，结果见表2。表2样品含量测定结果3讨论选定提取溶剂后，在相同水解条件下，分别用水浴回流提取与超声提取处理样品，结果发现槲皮素总含量，水浴回流法比超声提取法高一倍多，说明回流更有利于黄酮类物质的水解，因此选定水浴回流提取的方法［5］。为了保证

8、被测成分在回流提取过程中能全部提净，实验研究中对样品提取次数作了考察，结果见表3。表3提取次数的考察实验结果表明加热回流提取2次与3次的结果基本一致,