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时间:2018-11-22
《β淀粉样蛋白对小胶质细胞合成一氧化氮的影响论文》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、β淀粉样蛋白对小胶质细胞合成一氧化氮的影响论文韩笑峰吕丽葛汝丽唐荣华【摘要】目的探讨β淀粉样蛋白(amyloidbetapeptide,Aβ)诱导小胶质细胞活化后κ轻链核因子(nuclearfactorkappaB,NFκB)的表达及一氧化氮(NO)水平的变化。方法Aβ干预纯化培养的小胶质细胞,观察其形态学变化,采用镉还原法测定NO水平,免疫细胞化学方法研究NFκB的表达。结果500nmol/L及1000nmol/LAβ干预组细胞形态呈“阿米巴样”,细胞核内NFκB的表达增加(P<0.05),培养基中NO浓度升高(P<
2、0.05)。结论Aβ激活小胶质细胞NFκB途径大量合成NO,可能参与阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)的致病过程。【关键词】β淀粉样蛋白小胶质细胞κ轻链核因子一氧化氮阿尔茨海默病【Abstract】ObjectiveTostudythemorphologicalchangesofmicroglialcellactivatedbyamyloidbetapeptide,theexpressionofnuclearfactorkappaBincreasedinnucleusandthelevelsofni
3、tricoxideinculturalmedium.MethodsPurifiedmicroglialcellsyloidbetapeptideandthemorphologicalchangesiumreductionmethodinethelevelsofnitricoxideinculturemedium,immunocytochemicalmethodtoinvestigatechangesofnuclearfactorkappaB.ResultsThereentalgroupof100nmol/Lamyloidbe
4、tapeptideandthecontrolgroup(P>0.05).Intheexperimentalgroupsof500nmol/Land1000nmol/Lamyloidbetapeptide,microglialcellsediumthancontrolgroup(P<0.05).ConclusionTheamyloidbetapeptidecouldparticipateintheprocessesofAlzheimer’sdiseasebyinducingmicroglialcellstoexcretenit
5、ricoxide.【Keyyloidbetapeptide,microglialcell.freeler’sdisease阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)重要的病理特征之一是纤维状β淀粉样蛋白(amyloidbetapeptide,Aβ)在神经细胞外及脑血管壁沉积形成老年斑(senileplaques,SP)。大量研究表明,Aβ的沉积在AD发病中起着关键作用,但其神经损伤的具体机制尚不完全清楚,研究提示,一氧化氮(nitricoxide,NO)可能与Aβ的神经毒性有关。本研究用Aβ干预小胶质细胞,观
6、测κ轻链核因子(nuclearfactorkappaB,NFκB)的表达以及NO水平的变化,探讨Aβ诱导小胶质细胞合成NO的机制。1材料和方法1.1材料1.1.1动物:出生3d内的EM/F12培养基、胎牛血清(购自Hyclone公司),Aβ140、Aβ142(购自SIGMA公司),胰蛋白酶、TritonX100(购自Amresco公司),小鼠抗大鼠CD11b单克隆抗体(购自Serotec公司),兔抗NFκBp65多克隆抗体(购自SANTACRUZ公司),抗小鼠及抗兔SP试剂盒和DAB显色试剂盒(均购自北京中山生物技术有
7、限公司)。1.2方法1.2.1小胶质细胞分离、培养:在无菌条件下取出新生EM/F12培养基重新悬浮细胞,接种于多聚赖氨酸包被的50ml培养瓶中,置于37℃、含5%CO2、20%O2饱和湿度的培养箱中培养。原代混合胶质细胞培养7~9d后,在37℃恒温摇床上以250r/min振速摇动处理2.5h,将细胞悬液接种到已放置盖玻片的培养皿中,37℃培养1h,弃未贴壁细胞,加新鲜培养基,培养5~7d即可使用。用免疫细胞化学方法标记其特异性抗原CD11b进行细胞纯度鉴定,小胶质细胞比例占90%以上即符合要求。1.2.2Aβ的“老化(aged)”
8、:用无菌三蒸水将Aβ稀释成0.5×105nmol/L,37℃孵育1周,使其变为聚集状态的Aβ[1]。1.2.3小胶质细胞的干预:培养皿中分别加入不同浓度的“老化”Aβ140或Aβ142,对照组则不加Aβ,继续培养24h。收集培养基,-80℃保存
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