淀粉样蛋白对小胶质细胞合成一氧化氮的影响的论文

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1、淀粉样蛋白对小胶质细胞合成一氧化氮的影响的论文作者：韩笑峰吕丽葛汝丽唐荣华【摘要】目的探讨β淀粉样蛋白(amyloidbetapeptide,aβ)诱导小胶质细胞活化后κ轻链核因子(nuclearfactorkappab,nfκb)的表达及一氧化氮(no)水平的变化。方法aβ干预纯化培养的小胶质细胞，观察其形态学变化，采用镉还原法测定no水平，免疫细胞化学方法研究nfκb的表达。结果500nmol/l及1000nmol/laβ干预组细胞形态呈“阿米巴样”，细胞核内nfκb的表达增加（p＜0.05），培养基中no浓度升高（p＜0.05）。结论aβ激活小胶质细胞nfκ

2、b途径大量合成no，可能参与阿尔茨海默病(alzheimer’sdisease,ad)的致病过程。【关键词】β淀粉样蛋白小胶质细胞κ轻链核因子一氧化氮阿尔茨海默病【abstract】objectivetostudythemorphologicalchangesofmicroglialcellactivatedbyamyloidbetapeptide,theexpressionofnuclearfactorkappabincreasedinnucleusandthelevelsofnitricoxideinculturalmedium.methodspurifiedmicr

3、oglialcellsyloidbetapeptideandthemorphologicalchangesiumreductionmethodinethelevelsofnitricoxideinculturemedium,immunocytochemicalmethodtoinvestigatechangesofnuclearfactorkappab.resultsthereentalgroupof100nmol/lamyloidbetapeptideandthecontrolgroup(p＞0.05).intheexperimentalgroupsof500nmol

4、/land1000nmol/lamyloidbetapeptide,microglialcellsediumthancontrolgroup(p＜0.05).conclusiontheamyloidbetapeptidecouldparticipateintheprocessesofalzheimer’sdiseasebyinducingmicroglialcellstoexcretenitricoxide.【keyyloidbetapeptide，microglialcell，nuclearfactorkappab，nitricoxide，alzheimer’sdis

5、ease阿尔茨海默病(alzheimer’sdisease,ad)重要的病理特征之一是纤维状β淀粉样蛋白(amyloidbetapeptide,aβ)在神经细胞外及脑血管壁沉积形成老年斑(senileplaques,sp)。.大量研究表明，aβ的沉积在ad发病中起着关键作用，但其神经损伤的具体机制尚不完全清楚，研究提示，一氧化氮(nitricoxide,no)可能与aβ的神经毒性有关。本研究用aβ干预小胶质细胞，观测κ轻链核因子(nuclearfactorkappab,nfκb)的表达以及no水平的变化，探讨aβ诱导小胶质细胞合成no的机制。1材料和方法1.1材料1.1

6、.1动物：出生3d内的em/f12培养基、胎牛血清（购自hyclone公司），aβ140、aβ142（购自sigma公司），胰蛋白酶、tritonx100（购自amresco公司），小鼠抗大鼠cd11b单克隆抗体（购自serotec公司），兔抗nfκbp65多克隆抗体（购自santacruz公司），抗小鼠及抗兔sp试剂盒和dab显色试剂盒（均购自北京中山生物技术有限公司）。1.2方法1.2.1小胶质细胞分离、培养：在无菌条件下取出新生m3碎块，加入1ml0.125%胰蛋白酶室温消化，用100目不锈钢筛网过滤，离心，弃上清，加入dmem/f12培养基重新悬浮细胞，接种于多

7、聚赖氨酸包被的50ml培养瓶中，置于37℃、含5%co2、20%o2饱和湿度的培养箱中培养。原代混合胶质细胞培养7～9d后，在37℃恒温摇床上以250r/min振速摇动处理2.5h，将细胞悬液接种到已放置盖玻片的培养皿中，37℃培养1h，弃未贴壁细胞，加新鲜培养基，培养5～7d即可使用。用免疫细胞化学方法标记其特异性抗原cd11b进行细胞纯度鉴定，小胶质细胞比例占90%以上即符合要求。1.2.2aβ的“老化（aged）”：用无菌三蒸水将ａβ稀释成0.5×105nmol/l，37℃孵育1周，使