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时间:2018-07-06
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1、淀粉样蛋白对小胶质细胞合成一氧化氮的影响的论文作者:韩笑峰吕丽葛汝丽唐荣华【摘要】目的探讨β淀粉样蛋白(amyloidbetapeptide,aβ)诱导小胶质细胞活化后κ轻链核因子(nuclearfactorkappab,nfκb)的表达及一氧化氮(no)水平的变化。方法aβ干预纯化培养的小胶质细胞,观察其形态学变化,采用镉还原法测定no水平,免疫细胞化学方法研究nfκb的表达。结果500nmol/l及1000nmol/laβ干预组细胞形态呈“阿米巴样”,细胞核内nfκb的表达增加(p<0.05),培养基中no浓度升高(p<0.05)。结论aβ激活小胶质细胞nfκ
2、b途径大量合成no,可能参与阿尔茨海默病(alzheimer’sdisease,ad)的致病过程。【关键词】β淀粉样蛋白小胶质细胞κ轻链核因子一氧化氮阿尔茨海默病【abstract】objectivetostudythemorphologicalchangesofmicroglialcellactivatedbyamyloidbetapeptide,theexpressionofnuclearfactorkappabincreasedinnucleusandthelevelsofnitricoxideinculturalmedium.methodspurifiedmicr
3、oglialcellsyloidbetapeptideandthemorphologicalchangesiumreductionmethodinethelevelsofnitricoxideinculturemedium,immunocytochemicalmethodtoinvestigatechangesofnuclearfactorkappab.resultsthereentalgroupof100nmol/lamyloidbetapeptideandthecontrolgroup(p>0.05).intheexperimentalgroupsof500nmol
4、/land1000nmol/lamyloidbetapeptide,microglialcellsediumthancontrolgroup(p<0.05).conclusiontheamyloidbetapeptidecouldparticipateintheprocessesofalzheimer’sdiseasebyinducingmicroglialcellstoexcretenitricoxide.【keyyloidbetapeptide,microglialcell,nuclearfactorkappab,nitricoxide,alzheimer’sdis
5、ease阿尔茨海默病(alzheimer’sdisease,ad)重要的病理特征之一是纤维状β淀粉样蛋白(amyloidbetapeptide,aβ)在神经细胞外及脑血管壁沉积形成老年斑(senileplaques,sp)。.大量研究表明,aβ的沉积在ad发病中起着关键作用,但其神经损伤的具体机制尚不完全清楚,研究提示,一氧化氮(nitricoxide,no)可能与aβ的神经毒性有关。本研究用aβ干预小胶质细胞,观测κ轻链核因子(nuclearfactorkappab,nfκb)的表达以及no水平的变化,探讨aβ诱导小胶质细胞合成no的机制。1材料和方法1.1材料1.1
6、.1动物:出生3d内的em/f12培养基、胎牛血清(购自hyclone公司),aβ140、aβ142(购自sigma公司),胰蛋白酶、tritonx100(购自amresco公司),小鼠抗大鼠cd11b单克隆抗体(购自serotec公司),兔抗nfκbp65多克隆抗体(购自santacruz公司),抗小鼠及抗兔sp试剂盒和dab显色试剂盒(均购自北京中山生物技术有限公司)。1.2方法1.2.1小胶质细胞分离、培养:在无菌条件下取出新生m3碎块,加入1ml0.125%胰蛋白酶室温消化,用100目不锈钢筛网过滤,离心,弃上清,加入dmem/f12培养基重新悬浮细胞,接种于多
7、聚赖氨酸包被的50ml培养瓶中,置于37℃、含5%co2、20%o2饱和湿度的培养箱中培养。原代混合胶质细胞培养7~9d后,在37℃恒温摇床上以250r/min振速摇动处理2.5h,将细胞悬液接种到已放置盖玻片的培养皿中,37℃培养1h,弃未贴壁细胞,加新鲜培养基,培养5~7d即可使用。用免疫细胞化学方法标记其特异性抗原cd11b进行细胞纯度鉴定,小胶质细胞比例占90%以上即符合要求。1.2.2aβ的“老化(aged)”:用无菌三蒸水将aβ稀释成0.5×105nmol/l,37℃孵育1周,使
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