医学毕业论文β淀粉样蛋白对小胶质细胞合成一氧化氮的影响

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1、爲淀粉样蛋白对小胶质细胞合成一氧化氮的影响姓名：2014年6月25日P淀粉样蛋白对小胶质细胞合成一氧化氮的影响作者：韩笑峰吕丽葛汝丽唐荣华【摘要】目的探讨p淀粉样蛋白(amyloidbetapeptide，Ap)诱导小胶质细胞活化后k轻链核因子(nuclearfactorkappaB,NFkB)的表达及一氧化氮(NO)水平的变化。方法AP干预纯化培养的小胶质细胞，观察其形态学变化，采用镉还原法测定NO水平，免疫细胞化学方法研究NFkB的表达。结果500nmol/L及1000nmol/LAp干预组细胞形态呈“阿米巴样”，细胞核内NFkB的表达增加(P<0.05),培养基屮NO浓度升高(P

2、<0.05)。结论Ap激活小胶质细胞NFkB途径大量合成NO：可能参与阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease，AD)的致病过程。【关键词】P淀粉样蛋白小胶质细胞k轻链核因子一氧化氮阿尔茨海默病【Abstract】ObjectiveTostudythemorphologicalchangesofmicroglialcellactivatedbyamyloidbetapeptide,theexpressionofnuclearfactorkappaBincreasedinnucleusandthelevelsofnitricoxideinculturalmedium.Metho

3、dsPurifiedmicroglialcellswereintervenedbyamyloidbetapeptideandthemorphologicalchangeswereobserved.Thecadmiumreductionmethodwasusedtodeterminethelevelsofnitricoxideinculturemedium，immunocytochemicalmethodtoinvestigatechangesofnuclearfactorkappaB.ResultsTherewerenostatisticalsignificantdifferences

4、betweentheexperimentalgroupof100nmol/Lamyloidbetapeptideandthecontrolgroup(P〉0.05).Intheexperimentalgroupsof500nmol/Land1000nmol/Lamyloidbetapeptide,microglialcellswerebigger，theexpressionofnuclearfactorkappaBincreasedinnucleusandthelevelsofnitricoxidewerehigherinculturemediumthancontrolgroup(P<

5、0.05).ConclusionTheamyloidbetapeptidecouldparticipateintheprocessesofAlzheimer’sdiseasebyinducingmicroglialcellstoexcretenitricoxide.【Keywords】amyloidbetapeptide,microglialcell，nuclearfactorkappaB，nitricoxide,Alzheimer'sdisease阿尔茨海默病（Alzheimer’sdisease，AD）重要的病理将征之一是纤维状p淀粉禅蛋A（amyloidbetapeptide,A

6、p）在祌经细胞外及脑血管壁沉积形成老年斑（senileplaques,SP）。大量研究表明，Ap的沉积在AD发病中起着关键作用，但其神经损伤的具体机制尚不完全清楚，研究提示，一氧化氮（nitricoxide，NO）可能与AP的神经毒性有关。本研究用AP干预小胶质细胞，观测k轻链核因子（nuclearfactorkappaB,NFkB）的丧达以及NO水T的变化，探讨Ap诱导小胶质细胞合成NO的机制。1材料和方法1.1材料1.1.1动物：出生3d内的Wistar大鼠，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。1.1.2试剂..DMEM/F12培养基、胎牛血清（购自Hyclone公司），Ap

7、l40、Apl42（购自SIGMA公司），胰蛋白酶、TritonX100（购自Amresco公司）,小鼠抗大鼠CDllb单克隆抗体（购自Serotec公司），兔抗NFkBp65多克隆抗体（购自SANTACRUZ公司），抗小鼠及抗兔SP试剂盒和DAB显色试剂盒（均购自北京中山生物技术有限公司）。1.2方法1.2.1小胶质细胞分离、培养：在无菌条件下取出新生Wistar大鼠的大脑，剥离脑膜，取大脑皮层，剪成0.5mm3碎块，加入1ml0.125%胰