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时间:2018-12-05
《医学毕业论文β淀粉样蛋白对小胶质细胞合成一氧化氮的影响》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、爲淀粉样蛋白对小胶质细胞合成一氧化氮的影响姓名:2014年6月25日P淀粉样蛋白对小胶质细胞合成一氧化氮的影响作者:韩笑峰吕丽葛汝丽唐荣华【摘要】目的探讨p淀粉样蛋白(amyloidbetapeptide,Ap)诱导小胶质细胞活化后k轻链核因子(nuclearfactorkappaB,NFkB)的表达及一氧化氮(NO)水平的变化。方法AP干预纯化培养的小胶质细胞,观察其形态学变化,采用镉还原法测定NO水平,免疫细胞化学方法研究NFkB的表达。结果500nmol/L及1000nmol/LAp干预组细胞形态呈“阿米巴样”,细胞核内NFkB的表达增加(P<0.05),培养基屮NO浓度升高(P
2、<0.05)。结论Ap激活小胶质细胞NFkB途径大量合成NO:可能参与阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)的致病过程。【关键词】P淀粉样蛋白小胶质细胞k轻链核因子一氧化氮阿尔茨海默病【Abstract】ObjectiveTostudythemorphologicalchangesofmicroglialcellactivatedbyamyloidbetapeptide,theexpressionofnuclearfactorkappaBincreasedinnucleusandthelevelsofnitricoxideinculturalmedium.Metho
3、dsPurifiedmicroglialcellswereintervenedbyamyloidbetapeptideandthemorphologicalchangeswereobserved.Thecadmiumreductionmethodwasusedtodeterminethelevelsofnitricoxideinculturemedium,immunocytochemicalmethodtoinvestigatechangesofnuclearfactorkappaB.ResultsTherewerenostatisticalsignificantdifferences
4、betweentheexperimentalgroupof100nmol/Lamyloidbetapeptideandthecontrolgroup(P〉0.05).Intheexperimentalgroupsof500nmol/Land1000nmol/Lamyloidbetapeptide,microglialcellswerebigger,theexpressionofnuclearfactorkappaBincreasedinnucleusandthelevelsofnitricoxidewerehigherinculturemediumthancontrolgroup(P<
5、0.05).ConclusionTheamyloidbetapeptidecouldparticipateintheprocessesofAlzheimer’sdiseasebyinducingmicroglialcellstoexcretenitricoxide.【Keywords】amyloidbetapeptide,microglialcell,nuclearfactorkappaB,nitricoxide,Alzheimer'sdisease阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)重要的病理将征之一是纤维状p淀粉禅蛋A(amyloidbetapeptide,A
6、p)在祌经细胞外及脑血管壁沉积形成老年斑(senileplaques,SP)。大量研究表明,Ap的沉积在AD发病中起着关键作用,但其神经损伤的具体机制尚不完全清楚,研究提示,一氧化氮(nitricoxide,NO)可能与AP的神经毒性有关。本研究用AP干预小胶质细胞,观测k轻链核因子(nuclearfactorkappaB,NFkB)的丧达以及NO水T的变化,探讨Ap诱导小胶质细胞合成NO的机制。1材料和方法1.1材料1.1.1动物:出生3d内的Wistar大鼠,由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。1.1.2试剂..DMEM/F12培养基、胎牛血清(购自Hyclone公司),Ap
7、l40、Apl42(购自SIGMA公司),胰蛋白酶、TritonX100(购自Amresco公司),小鼠抗大鼠CDllb单克隆抗体(购自Serotec公司),兔抗NFkBp65多克隆抗体(购自SANTACRUZ公司),抗小鼠及抗兔SP试剂盒和DAB显色试剂盒(均购自北京中山生物技术有限公司)。1.2方法1.2.1小胶质细胞分离、培养:在无菌条件下取出新生Wistar大鼠的大脑,剥离脑膜,取大脑皮层,剪成0.5mm3碎块,加入1ml0.125%胰
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