雌激素对β淀粉样蛋白（2535）诱导的大鼠皮质神经元细胞凋亡的影响

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1、中文捅萤中文摘要题目：雌激素对13淀粉样蛋白(25—35)诱导的大鼠皮质神经元细胞凋亡的影响硕士研究生：周璃导师：任慕兰教授学校；东南大学背景：已有流行病学研究及临床试验表明雌激素对阿尔茨海默病(Alzheimer’Sdisease，AD)具有防治作用，基础试验也表明雌激素对中枢神经系统功能具有广泛和重要的作用，它不仅可以调节神经内分泌和生殖功能，而且对AD等一些神经退行性疾病有直接的保护效应，但目前证据仍不充分，机制也并未完全阐明。目的：研究雌激素是否可以抑制B淀粉样蛋白(13-amyloidprotein，A0)诱导的大鼠神经细胞凋亡，研究

2、此效应是否通过调节抗凋亡分子Bcl．2(B—cellleukemia／lymphoma2)及线粒体途径中凋亡体成分凋亡蛋白酶活化因子1(apoptoticproteaseactivatingfactorl，Apaf-1)的表达来介导，研究雌激素受体阻滞剂他莫昔芬(tamoxifen，TMX)对雌激素效应的影响，探讨雌激素神经保护功能和机制，为临床上雌激素替代治疗(estrogenreplacementtherapy,ERT)对～些神经退行性疾病如AD的防治作用提供更多依据，有助于ERT的进一步拓展。方法：取新生24h内SD大鼠的大脑皮质进行分离

3、和体外原代培养，用神经特异性烯醇化酶(neuron-specificenolase，NSE)进行免疫细胞化学标记鉴定神经元。用A13(25．35)2511moI／L处理大鼠皮质神经元细胞24小时，与空白对照组相比观察AB(25-35)对原代培养的大鼠皮质神经元细胞凋亡的影响。0nm01／L，lnmol／L和30nmol／L1713-雌二醇(1713．estradiol，17辟-E2)联合或不联合llamol／L的雌激素受体拮抗剂TMX预处理大鼠皮质神经元细胞48小时，再将神经元细胞暴露于25Ⅲnol／LA[5(25．35)中24小时，观察17B

4、．E2及TMX对AB(25．35)诱导的神经元细胞凋亡的影响。用相差倒置显微镜、Giemsa染色及Hochest33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化，测定乳酸脱氢酶(1actatedehydrohenase，LDH)释放率表示细胞的死亡率，用HochesG3259荧光染色及AnnexinV／Pl双染色流式细胞术两种方法检测细胞凋亡率，用半定量RT-PCR方法检测Bel．2及Apaf-l在转录水平的表达。结果：25praol／LAIB(25—35)可以诱导大鼠皮质神经元细胞损伤及凋亡，下调抗凋亡分子Bcl-2的表达及上调凋亡体成分Apaf-

5、1的表达。tnmol／L和30nmol／L17p-E2预处理4s小时显著抑制AB(25—35)诱导韵大鼠皮质神经元细胞损伤和凋亡的作用，并且显著抑制AB(25—35)’F调Bcl-2及上调Apaf-1的表达的作用。1iJ_mol／L雌激素受体阻滞荆TMX单用时对A13(25．35)诱导的大鼠皮质神经细胞凋亡无影响，与17B—E2联合使用可以部分阻断雌激素抑制神经元细胞凋亡的效应，完全阻断雌激素上调抗凋亡分子Bcl-2的表达及部分阻断雌激素下调Apaf-1的表达。Inmol／L和30nmol／L17BIE2的神经保护效应无显著差别。结论：1．A_

6、B可以通过下调抗凋亡分子Bcl一2及上调线粒体途径中凋亡体的组成成分Apaf-1的表达诱导原代培养的大鼠皮质神经元细胞凋亡。2．雌激素可以通过上调抗凋亡分子Bcl·2的表达，下调线粒体途径中凋亡体的组成成分Apaf-1的表达，从而阻断Ap诱导的线粒体凋亡途径来抑制Ap诱导的大鼠皮质神经元细胞祸亡。3．雌激素抑制A6诱导的大鼠皮质神经元细胞捅亡的效应部分由雌激素受体介导。雌激素上调抗凋亡分子Bcl一2的表达可能完全通过雌激素受体途径，而下调Apaf-I的表达只部分依赖于雌激素受体。4．TMX对AB(25．35)诱导的火鼠皮质神经元细胞凋亡无保护效

7、应。5．高雌激素浓度并不比生理浓度的雌激素更具有神经保护效应。6．雌激素可能通过抑制神经细胞凋亡来防治AD的发生及发展。关键词：雌激素，B淀粉样蛋白，神经细胞培养，Bcl一2．Apaf-I，阿尔茨海默病英文文摘EnglishAbstractTITLE：Effectsofestrogenon13amyloidprotein(25-35)-inducedapoptosisinprimaryculturesofratcorticalneuronsMASTERCANDIDATE：ZHOULinDIRECToR：ProfessorRENMu-lanFRo

8、M：SoutheastUniversityBACKGROUND：Accumulatedepidemiologicalandclinicaleviden