fak的阻断对mhcc97肝癌细胞侵袭性的影响

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1、FAK的阻断对MHCC97肝癌细胞侵袭性的影响【摘要】目的通过对MHCC97肝癌细胞株的FAK基因的表达进行干预，观察MHCC97肝癌细胞侵袭转移能力的变化。方法用OligofecTAMINE介导的方法，将反义FAKODN引入MHCC97肝癌细胞株，或用GenistEin抑制MHCC97肝癌细胞FAK磷酸化方法，观察经过不同干预后的MHCC97肝癌细胞穿透Matrigel胶处理后的Transacells.MethodsOligofecTAMINE-mediatedantisenseFAKODNacells.Theinvasiveactivi

2、tyoftumorcellsberhasbeendealed.ResultsAntisenseFAKODNandGenisteincanbothdecreasetheinvasionofMHCC97hepatocellularcarcinomacells.ConclusionInhibitionofFAKexpressioncaninhibittheinvasionabilityofMHCC97hepatocellularcarcinomacells.【Keyacell；invasion肝癌严重威胁着人类的健康，在中国肝癌的发病率一直呈逐年

3、上升趋势。我国每年约11万人死于肝癌，占全世界肝癌年死亡总数的45%。肝癌的侵袭转移性高是其治疗失败的主要原因。尽管目前对肝癌的治疗，无论是在手术还是在局部或全身的辅助治疗（包括放疗、化疗）措施上都取得了很大的进步。但仍难以控制其在局部和远处的转移。因此发展新的治疗策略具有十分重要的意义。从细胞、分子及所组成的网络结构认识细胞信号转导通路异常在肝癌细胞侵袭转移中的作用。为肝癌的防治提供新的思路。本文中我们通过反义FAKODN转染和Genistein抑制FAK磷酸化分别对MHCC97肝癌细胞FAK的表达进行不同干预，探讨受干预后的MHCC97

4、肝癌细胞的侵袭力的变化。1材料与方法1.1实验材料MHCC97肝癌细胞株由上海医科大学附属中山医院肝癌研究所提供。OligofecTAMIMReagent购于Invitrogen公司。Transa公司。Matrigel胶购于BDBiosciences公司。1.2OligofecTAMINE介导的反义FAKODN转染反义FAKODN5’-ATAATCCAGCTTGAACCAAG-3’。由上海生工生物工程公司DNA合成，全硫代修饰，聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化，冻存。OligofecTAMINE按产品说明书介导转染培养细胞。对照组只加入脂质体不加入反

5、义FAKODN。1.3Genistein抑制FAK磷酸化以10μg/ml的终浓度加入细胞培养液中，并使DMSO终浓度为0.4%。实验对照组以同样终浓度为0.4%的溶剂处理。1.4细胞体外侵袭能力检测法Trans孔径）黏附于Transl，加入滤膜上表面（5μg/滤膜），室温下通风橱中干燥过夜。用前Matrigel以40μl无血清培养基重建20min后备用。将行不同预处理后的细胞用无血清培养基洗3次，0.25%胰蛋白酶消化，重悬于含0.1%BSA的培养基中，取2×106/ml细胞100μl加入至上室，600μl0.1%小牛血清培养基加入下室。3

6、7℃、5%CO2条件下培养20h后，滤膜用甲醇固定5min，行Gimsa染色。去除滤膜上层细胞，显微镜下（×320）计数滤膜下表面细胞数，随机计数5个视野中的细胞数目，每个标本重复2次，实验重复2次，以侵袭细胞的相对数目来表示肿瘤细胞的侵袭能力。1.5统计学方法采用t检验。2结果我们发现转染反义FAKODN和经Genistein处理后的MHCC97肝癌细胞穿透Matrigel胶处理后的Trans.表1各组细胞穿透Matrigel胶的穿膜侵袭细胞数目注：与未处理组相比，*P＜0.053讨论肝癌的侵袭和转移是其主要的致死因素，转移过程是以侵袭为

7、基础发生的，因此侵袭也是转移的先决条件和前提，侵袭过程中肿瘤细胞脱离原发部位与基底膜相互黏附，并分泌降解酶降解BM和ECM。然后移动并穿过ECM，再侵入血液循环。进而形成转移灶［1］。由此可见肿瘤细胞的黏附及运动在侵袭过程中具有重要的意义。本文着力研究肝癌细胞的侵袭转移。整合素介导的信号转导过程中的关键性信号分子—FAM（focaladhesionkinase)在肿瘤侵袭转移中的作用正受到重视。FAK基因编码位于8q24，cDNA全长4285，编码1028个氨基酸［2］。pp125FAK是一个分子量为125KD的非受体的非膜性的胞质酪氨酸蛋

8、白激酶，在绝大多数组织和细胞中均有表达。1992年首先由Schaller鉴定。从鸟、鼠、非洲蟾蜍获得的FAK的cDNA中推导的蛋白质顺序发现FAK有高达90%的同源性，表明FAK