fak的阻断对mhcc97肝癌细胞侵袭性的影响论文

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1、FAK的阻断对MHCC97肝癌细胞侵袭性的影响论文.freelacells.MethodsOligofecTAMINE-mediatedantisenseFAKODNacells.Theinvasiveactivityoftumorcellsberhasbeendealed.ResultsAntisenseFAKODNandGenisteincanbothdecreasetheinvasionofMHCC97hepatocellularcarcinomacells.ConclusionInhibitionofFAK

2、expressioncaninhibittheinvasionabilityofMHCC97hepatocellularcarcinomacells.【Keyacell；invasion肝癌严重威胁着人类的健康，在中国肝癌的发病率一直呈逐年上升趋势。我国每年约11万人死于肝癌.freela公司。Matrigel胶购于BDBiosciences公司。1.2OligofecTAMINE介导的反义FAKODN转染反义FAKODN5’-ATAATCCAGCTTGAACCAAG-3’。由上海生工生物工程公司DNA合成，全硫代

3、修饰，聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化，冻存。OligofecTAMINE按产品说明书介导转染培养细胞。对照组只加入脂质体不加入反义FAKODN。1.3Genistein抑制FAK磷酸化以10μg/ml的终浓度加入细胞培养液中，并使DMSO终浓度为0.4%。实验对照组以同样终浓度为0.4%的溶剂处理。1.4细胞体外侵袭能力检测法Trans孔径）黏附于Transl，加入滤膜上表面（5μg/滤膜），室温下通风橱中干燥过夜。用前Matrigel以40μl无血清培养基重建20min后备用。将行不同预处理后的细胞用无血清培养基洗3次，

4、0.25%胰蛋白酶消化，重悬于含0.1%BSA的培养基中，取2×106/ml细胞100μl加入至上室，600μl0.1%小牛血清培养基加入下室。37℃、5%CO2条件下培养20h后，滤膜用甲醇固定5min，行Gimsa染色。去除滤膜上层细胞，显微镜下（×320）计数滤膜下表面细胞数，随机计数5个视野中的细胞数目，每个标本重复2次，实验重复2次，以侵袭细胞的相对数目来表示肿瘤细胞的侵袭能力。1.5统计学方法采用t检验。2结果我们发现转染反义FAKODN和经Genistein处理后的MHCC97肝癌细胞穿透Matrig

5、el胶处理后的TransamotoH，ItohF，AdachiY，etal.Relationofenhancedsecretionofactivematrix，metalloproteinasesorspreadinhumanhepatocellularcarcinoma.Gastroenterology，1997，112：1290-1296.2AgochiyaM，BruntonVG，Oplificationofthefocaladhesionkinasegeneinhumancancercells.Oncogen

6、e，1999，18：5646-5653.3SchlaepferMD，ParsonsJT.Focaladhesionkinaseandassociatedprotein.CurrOpinCellBiol，1994，6(5)：705-710.4DavidDS，ChristofRH，DavidJS.Signalingthroughfocaladhesionkinase.ProgBiophyMolBiol，1999，71：435-478.5KumarCC.Signalingbyintegrinreceptors.Oncog

7、ene，1998，17(11)：1365-1373.6AyakiM，KomatsuK，MukaiM，etal.Reducedexpressionoffocaladhesionkinaseinlivermetastasesparedatchedprimaryhumancolorectaladenocarcinomas.ClinCancerRes，2001，7(10)：3106-3112.7BruntonVG，FinchamVJ，McLeanGentofintegrin-dependentadhesionincolon

8、epithelialcellsrequireFAK-andERk-mediatedactinspikeformation：deregulationincancercells.Neoplasia，2001，3(3)：215-226.8SiegDJ，HauckCR，SchlaepferDD.Requiredroleoffocaladhesionkinase(FA