抑癌基因p33ing1在人皮肤血管瘤组织中的表达及统计分析论文

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1、抑癌基因P33ING1在人皮肤血管瘤组织中的表达及统计分析论文【摘要】目的：探讨抑癌基因P33ING1在人皮肤血管瘤组织中的表达及在血管瘤发生、发展过程中的意义。方法：应用免疫组织化学方法检测了血管瘤增生期、退化期以及正常皮肤组织中抑癌基因P33ING1的表达水平,采用HPIAS1000图文报告管理系统对P33ING1的表达进行定量分析，并用SPSS11.5软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验。结果：P33ING1在增生期血管瘤内皮细胞呈低表达,退化期呈高表达，增生期血管瘤内

2、皮细胞与退化期比较,P33ING1的表达差异有显著性(P0.05);退化期血管瘤内皮细胞P33ING1表达水平与正常组织相比，差异无显著性(P0.01)。结论：P33ING1作为抑癌基因,通过抑制内皮细胞凋亡而促进血管瘤的增生。P33ING1在血管瘤的发生发展中起了重要作用。【关键词】皮肤血管瘤;P33ING1;免疫组织化学;统计分析血管瘤是婴幼儿较常见的一种良性血管肿瘤，大多数血管瘤都有一个由增生到消退的自然病理演变过程1～3，但至今其病理演变机制仍不完全清楚，因此给血管瘤的诊断和治疗带来许多困难。细胞凋亡是多细胞有机体为调控机

3、体发育、维持内环境稳定由基因调控的细胞主动死亡过程。血管瘤自发消退的过程中无炎症反应，无组织坏死.freelpus公司)。1.3方法1.3.1HE染色蜡块切片厚5μm，贴片于涂有多聚赖氨酸的洁净载玻片上，置于烤箱烤干待用。常规HE染色。1.3.2免疫组织化学SP法检测P33ING1和PA相关抗原具体步骤如下：①4μm组织切片常规脱蜡至水后，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;②抗原修复(柠檬酸缓冲液微波抗原修复法)，室温自然冷却后，0.01MPBS(pH7.4)漂洗5×3min;③滴加3%过氧化氢，37℃湿盒孵育10m

4、in以抑制内源性过氧化物酶活性，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;④正常羊血清37℃湿盒孵育10min以减少非特异性背景;⑤甩去多余血清，分别滴加一抗，4℃孵育过夜，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×5min;⑥滴加生物素标记的二抗37℃湿盒孵育10min，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;⑦滴加链霉素抗生物素蛋白-过氧化物复合物37℃湿盒孵育10min，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;⑧滴加新鲜配置的DAB显色液显色，光镜下控制反应时间(约3～5min)，自来水冲洗终止反应;⑨苏木

5、素复染，流水冲洗，1%盐酸酒精分色数秒，流水冲洗，0.1%氨水返蓝;⑩梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片并镜检;用PBS代替一抗作为阴性对照组，购买的阳性片作为阳性对照组，人正常皮肤表皮作为PA的阳性对照组。1.3.3免疫组织化学结果判断P33ING1阳性染色为棕黄色颗粒，主要定位于细胞核内，胞质内也有少量染色。PA以细胞核出现出现棕黄色颗粒为阳性反应。阴性对照组除细胞核染成蓝色外，应无棕黄色反应物。采用HPIAS1000高清晰度彩色病理图文报告管理系统(同济千屏影像公司)对P33ING1的表达进行定量分析，每张切片随机选取

6、5个完整而不重叠的高倍镜视野(×400),测定每个视野下阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积,计算阳性面积率。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值(阳性面积率=单位面积中阳性反应的总面积/单位面积中细胞的总面积×100%)。1.4统计学处理数据以均数±标准差表示，用SPSS11.5软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验，检验水准α为0.05。2结果2.1HE染色正常皮肤组织中的毛细血管由1到2个内皮细胞围成，管壁较薄，内皮细胞胞质薄，仅含

7、核的部分略厚，内皮细胞核扁平。增生期血管瘤组织中可见条索状或片状内皮细胞增生,其间有不规则的内皮间隙和完整的血管腔,内皮细胞核肥大而淡染。退化期血管瘤组织中内皮细胞减少,血管腔增大,血管间结缔组织增多,内皮细胞核扁平。2.2PA的表达增生期血管瘤内皮细胞核肥大,.freelangioma)是婴幼儿较常见的一种良性血管肿瘤，也见于成人。虽然部分个体皮肤的血管瘤可以自行消退，但生长部位特殊以及部分未自行消退的血管瘤具有一定的危险性。如：持续发展的血管瘤可产生溃疡、出血、感染等一系列并发症;而位于颜面部、颅内及口腔的血管瘤可引起明显的外

8、观畸形及功能障碍;大面积及多发性血管瘤由于占据大量血流可导致高输出性心力衰竭，直接威胁患者的生命6，7。皮肤血管瘤好发于头、面颈，次为四肢和躯干。发生率在新生儿为1.1%～2.6%，约有40%在出生时即可见到，时常在生后2～4周时快速生长。因此对这