抑癌基因P33ING1在人皮肤血管瘤组织中的表达及统计分析

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1、抑癌基因P33ING1在人皮肤血管瘤组织中的表达及统计分析【摘要】目的：探讨抑癌基因P33ING1在人皮肤血管瘤组织中的表达及在血管瘤发生、发展过程中的意义。方法：应用免疫组织化学方法检测了血管瘤增生期、退化期以及正常皮肤组织中抑癌基因P33ING1的表达水平,采用HPIAS1000图文报告管理系统对P33ING1的表达进行定量分析，并用SPSS11.5软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验。结果：P33ING1在增生期血管瘤内皮细胞呈低表达,退化期呈高表达，增生期血管瘤内皮细胞与退化期比较,P33ING1的表

2、达差异有显著性(P<0.05);退化期血管瘤内皮细胞P33ING1表达水平与正常组织相比，差异无显著性(P>0.01)。结论：P33ING1作为抑癌基因,通过抑制内皮细胞凋亡而促进血管瘤的增生。P33ING1在血管瘤的发生发展中起了重要作用。【关键词】皮肤血管瘤;P33ING1;免疫组织化学;统计分析12血管瘤是婴幼儿较常见的一种良性血管肿瘤，大多数血管瘤都有一个由增生到消退的自然病理演变过程[1～3]，但至今其病理演变机制仍不完全清楚，因此给血管瘤的诊断和治疗带来许多困难。细胞凋亡是多细胞有机体为调控机体发育、维持内环境稳定由基因调控的细胞主动死亡过

3、程。血管瘤自发消退的过程中无炎症反应，无组织坏死，非常符合凋亡的过程，因此许多研究者推测可能是由于增殖的血管内皮细胞凋亡导致血管瘤自发消退。　　P33ING1(Ihnibitorofgorwth)是一新的与P53密切相关的凋亡相关因子，有细胞生长抑制作用及促进细胞凋亡的作用[4，5]。抑癌基因对于肿瘤的发生具有抑制作用,细胞内一种或多种抑癌基因的失活可以导致肿瘤的发生。　　本研究通过应用免疫组织化学方法和图像分析技术检测血管瘤增生期、退化期以及正常皮肤织中P33ING1的表达水平，探讨P33ING1在血管瘤发生、发展过程中的作用机制，为临床上治疗血管瘤提供理论依据

4、。　　1材料和方法　　1.1材料　　1.1.1材料来源收集武汉大学人民医院病理科及武汉大学人民整形外科2000～2007年皮肤血管瘤存档蜡块50例，其中男性26例，女性24例。所有切片经病理学专家诊断为血管瘤。这些血管瘤所在的部位有头皮、前额、眼睑、耳背、颈部、背部、上臂、大腿、手和足的皮肤等。患者术前均未做任何辅助性治疗。12　　1.1.2材料分组常规HE染色和免疫组织化学SP法检测增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)，按Mulliken分类标准并结合PCNA的表达进行分组：增生期血管瘤27例，退化期血管瘤2

5、3例，另取瘤组织周围正常皮肤组织5例作对照。　　1.2主要试剂和仪器　　1.2.1主要试剂　　①即用型鼠抗人PCNA单克隆抗体(北京中山生物技术有限公司);②即用型鼠抗人P33ING1单克隆抗体(北京中山生物技术有限公司);③超敏即用型SP通用型免疫组织化学试剂盒(福州迈新公司);④DAB显色试盒及多聚赖氨酸(北京中山生物技术有限公司)。　　1.2.2主要仪器　　①YWY781型医用微波仪，250W，50Hz(浙江临安电子器材厂生产);②家用高压锅;③电热恒温干燥箱(湖北黄石医疗器械厂生产);④显微镜成像系统(Olympus公司)。　　1.3方法12　　1.3.1

6、HE染色蜡块切片厚5μm，贴片于涂有多聚赖氨酸的洁净载玻片上，置于烤箱烤干待用。常规HE染色。　　1.3.2免疫组织化学SP法检测P33ING1和PCNA相关抗原　　具体步骤如下：　　①4μm组织切片常规脱蜡至水后，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;　　②抗原修复(柠檬酸缓冲液微波抗原修复法)，室温自然冷却后，0.01MPBS(pH7.4)漂洗5×3min;　　③滴加3%过氧化氢，37℃湿盒孵育10min以抑制内源性过氧化物酶活性，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;　　④正常羊血清37℃湿盒孵育10min以减少非特异性背景;　　⑤甩去多

7、余血清，分别滴加一抗，4℃孵育过夜，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×5min;12　　⑥滴加生物素标记的二抗37℃湿盒孵育10min，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;　　⑦滴加链霉素抗生物素蛋白-过氧化物复合物37℃湿盒孵育10min，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;　　⑧滴加新鲜配置的DAB显色液显色，光镜下控制反应时间(约3～5min)，自来水冲洗终止反应;　　⑨苏木素复染，流水冲洗，1%盐酸酒精分色数秒，流水冲洗，0.1%氨水返蓝;　　⑩梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片并镜检;　　用PBS代替一抗作为阴性对照组，购

8、买的阳性片