抑癌基因p33^ing1在人皮肤血管瘤组织中的表达及统计分析

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1、数理医药学杂志2010年第23卷第1期文章编号：1004—4337(2010)01—0039—03中图分类号：R734．2文献标识码：A·基础医学研究·抑癌基因P33在人皮肤血管瘤组织中的表达及统计分析雷雨颖张端莲(武汉大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系武汉430071)摘要：目的：探讨抑癌基因P33~G在人皮肤血管瘤组织中的表达及在血管瘤发生、发展过程中的意义。方法：应用免疫组织化学方法检测了血管瘤增生期、退化期以及正常皮肤组织中抑癌基因P33的表达水平，采用HPIAS-1000图文报告管理系统对P33~o的表达进行定量分析，并用SPSS11．5软件对各组免疫组织化学

2、反应阳性颗粒平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验。结果：P33~G1在增生期血管瘤内皮细胞呈低表达，退化期呈高表达，增生期血管瘤内皮细胞与退化期比较，P33U',~的表达差异有显著性(P0．O1)。结论：P33~o作为抑癌基因，通过抑制内皮细胞凋亡而促进血管瘤的增生。P33~o在血管瘤的发生发展中起了重要作用。关键词：皮肤血管瘤；P33tNc；l；免疫组织化学；统计分析血管瘤是婴幼儿较常见的一种良性血管肿瘤，大多数血1．2主要试剂和仪器管瘤都有一个由增生到消退的自然病理

3、演变过程l_l]，但至1．2．1主要试剂今其病理演变机制仍不完全清楚，因此给血管瘤的诊断和治①即用型鼠抗人PCNA单克隆抗体(北京中山生物技术疗带来许多困难。细胞凋亡是多细胞有机体为调控机体发有限公司)；②即用型鼠抗人P33~a单克隆抗体(北京中山生育、维持内环境稳定由基因调控的细胞主动死亡过程。血管物技术有限公司)；③超敏即用型SP通用型免疫组织化学试瘤自发消退的过程中无炎症反应，无组织坏死，非常符合凋亡剂盒(福州迈新公司)；④DAB显色试盒及多聚赖氨酸(北京中的过程，因此许多研究者推测可能是由于增殖的血管内皮细山生物技术有限公司)。胞凋亡导致血管瘤自发消退。1．2．2

4、主要仪器P33(Ihnibitorofgorwth)是一新的与P53密切相关的①YW~781型医用微波仪，250W，5OHz(浙江临安电凋亡相关因子，有细胞生长抑制作用及促进细胞凋亡的作子器材厂生产)；②家用高压锅；③电热恒温干燥箱(湖北黄用_4]。抑癌基因对于肿瘤的发生具有抑制作用，细胞内一种石医疗器械厂生产)；④显微镜成像系统(Olympus公司)。或多种抑癌基因的失活可以导致肿瘤的发生。1．3方法本研究通过应用免疫组织化学方法和图像分析技术检测1．3．1HE染色蜡块切片厚5／,m，贴片于涂有多聚赖氨酸血管瘤增生期、退化期以及正常皮肤织中P33~~的表达水平，的洁净载

5、玻片上，置于烤箱烤干待用。常规HE染色。探讨P33~G在血管瘤发生、发展过程中的作用机制，为临床上1．3．2免疫组织化学SP法检测P33~G和PCNA相关抗原治疗血管瘤提供理论依据。具体步骤如下：①4m组织切片常规脱蜡至水后，0．01MPBS(pH7．4)1材料和方法漂洗3×3rain；1．1材料②抗原修复(柠檬酸缓冲液微波抗原修复法)，室温自然1．1．1材料来源收集武汉大学人民医院病理科及武汉大冷却后，0．01MPBS(pH7．4)漂洗5×3mira学人民整形外科2000～2007年皮肤血管瘤存档蜡块5O例，③滴加3过氧化氢，37~C湿盒孵育10rain以抑制内源其中男

6、性26例，女性24例。所有切片经病理学专家诊断为性过氧化物酶活性，0．01MPBS(pH7．4)漂洗3×3min；血管瘤。这些血管瘤所在的部位有头皮、前额、眼睑、耳背、颈④正常羊血清37~C湿盒孵育lOmin以减少非特异性背部、背部、上臂、大腿、手和足的皮肤等。患者术前均未做任何景；辅助性治疗。⑤甩去多余血清，分别滴加一抗，4℃孵育过夜，0．01M1．1．2材料分组常规HE染色和免疫组织化学SP法检测PBS(pH7．4)漂洗3×5min；增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)，按⑥滴加生物素标记的二抗37~C湿盒孵育lO

7、min，0．01MMulliken分类标准并结合PCNA的表达进行分组：增生期血PBS(pH7．4)漂洗3×3min；管瘤27例，退化期血管瘤23例，另取瘤组织周围正常皮肤组⑦滴加链霉素抗生物素蛋白一过氧化物复合物37~C湿织5例作对照。盒孵育10min，0．01MPBS(pH7．4)漂洗3x3min；收稿日期：2009—09—07通讯作者：张端莲作者简介：雷雨颖，现工作单位：河南省南阳市南阳医学高等专科学校，武汉大学在读硕士。·39·JournalofMathematicalMedicineVo1．23No．12010⑧滴加