ki67蛋白在人皮肤血管瘤组织中的表达及意义论文

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1、Ki67蛋白在人皮肤血管瘤组织中的表达及意义论文【摘要】目的：探讨Ki67蛋白在人皮肤血管瘤组织中的表达及在血管瘤发生、发展过程中的意义。方法：应用免疫组织化学方法检测了血管瘤增生期、退化期以及正常皮肤组织中Ki67蛋白的表达水平,采用HPIAS1000图文报告管理系统对Ki67蛋白的表达进行定量分析，并用SPSS11.5软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验。结果：Ki67蛋白在增生期血管瘤内皮细胞呈高表达,退化期呈低表达，增生期血管瘤内皮细胞与退化期比

2、较,Ki67蛋白的表达差异有显著性(P0.05);退化期血管瘤内皮细胞Ki67蛋白表达水平与正常组织相比，差异无显著性(P0.01)。结论：Ki67可作为评价细胞增殖状态的一个指标。【关键词】皮肤血管瘤;Ki67蛋白;免疫组织化学;统计分析血管瘤是婴幼儿中发病率最高的一种以内皮细胞异常增殖为组织学特征的肿瘤。新生儿患病率为1.1%～3.8%，至1岁时可高达10%。虽然部分血管瘤可以自行消退，但仍有部分未退化的血管瘤可持续发展或其生长部位特殊而具有一定的危险性，如果位于颜面、颅内及口腔可引起明显的畸形及功能障碍

3、，如持续发展可产生溃疡、出血、感染等一系列并发症;位于颜面及口腔的血管瘤可引起明显的外观畸形及功能障碍.freelpus公司)。1.3方法1.3.1蜡块切片厚5μm，贴片于涂有多聚赖氨酸的洁净载玻片上，置于烤箱烤干待用。常规HE染色。1.3.2免疫组织化学SP法检测Ki67抗原具体步骤：①4μm组织切片常规脱蜡至水后，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;②抗原修复(柠檬酸缓冲液微波抗原修复法)，室温自然冷却后，0.01MPBS(pH7.4)漂洗5×3min;③滴加3%过氧化氢，37℃湿盒孵育10m

4、in以抑制内源性过氧化物酶活性，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;④正常羊血清37℃湿盒孵育10min以减少非特异性背景;⑤甩去多余血清，分别滴加一抗，4℃孵育过夜，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×5min;⑥滴加生物素标记的二抗37℃湿盒孵育10min，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;⑦滴加链霉素抗生物素蛋白过氧化物复合物37℃湿盒孵育10min，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;⑧滴加新鲜配置的DAB显色液显色，光镜下控制反应时间(约3～5min)，自来

5、水冲洗终止反应;⑨苏木素复染，流水冲洗，1%盐酸酒精分色数秒，流水冲洗，0.1%氨水返蓝;⑩梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片并镜检;用PBS代替一抗作为阴性对照组，购买的阳性片作为阳性对照组。1.3.3免疫组织化学结果判断Ki67蛋白阳性染色为棕黄色颗粒，主要定位于细胞核内。阴性对照组除细胞核染成蓝色外，应无棕黄色反应物。采用HPIAS1000高清晰度彩色病理图文报告管理系统(同济千屏影像公司)对Ki67蛋白的表达进行定量分析，每张切片随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野(×400),测定每个视野下阳

6、性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积,计算阳性面积率。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值(阳性面积率=单位面积中阳性反应的总面积/单位面积中细胞的总面积×100%)。1.4统计学处理数据以均数±标准差表示，用SPSS11.5软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验，检验水准α为0.05。2结果增生期血管瘤内皮细胞胞核内可见密集分布的棕黄色颗粒，Ki67蛋白呈阳性表达;退化期血管瘤内皮细胞胞核内可见少量的棕黄色颗粒，Ki

7、67蛋白呈阴性表达;正常皮肤组织血管内皮细胞胞核内可见少量的棕黄色颗粒，Ki67蛋白表达呈弱阳性。图像分析结果显示:增生期组Ki67蛋白表达的平均光密度为0.3671±0.0264,退化期组Ki67蛋白表达的平均光密度为0.0973±0.0062,.freelangioma)是婴幼儿较常见的一种良性血管肿瘤，也见于成人。虽然部分个体皮肤的血管瘤可以自行消退，但生长部位特殊以及部分未自行消退的血管瘤具有一定的危险性。如：持续发展的血管瘤可产生溃疡、出血、感染等一系列并发症;而位于颜面部、颅内及口腔的血管瘤可引起

8、明显的外观畸形及功能障碍;大面积及多发性血管瘤由于占据大量血流可导致高输出性心力衰竭，直接威胁患者的生命。皮肤血管瘤好发于头、面颈，次为四肢和躯干。发生率在新生儿为1.1%～2.6%，约有40%在出生时即可见到，时常在生后2～4周时快速生长。因此对这一部分血管瘤采取何种治疗手段是目前临床及基础研究较为关注的课题。Ki67属于非组蛋白，对蛋白酶高度敏感，很难分离提取。它的测定是评估人类各种组织增殖组分