溴麝香草酚蓝比色法测定叶下珠生物碱的含量论文

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1、溴麝香草酚蓝比色法测定叶下珠生物碱的含量论文邓光辉胡炜刘榕城张桂华农林【摘要】目的测定叶下珠中总生物碱的含量。方法以溴麝香草酚蓝为显色剂于415nm波长处测定吸光度。结果苦参碱在0.004～0.02mg／ml范围内线性关系良好（r=0.99754）；其与溴麝香草酚蓝所形成的离子对产物在6h内稳定；平均加样回收率为98.65％(RSD=1.98％)。结论该方法简单、快速、准确，可用于生药及产品的生物碱质量控制。【关键词】溴麝香草酚蓝比色法叶下珠生物碱叶下珠(别名珍珠草)为大戟科叶下珠属中的一种草本植物，具有清肝明目

2、、解毒消肿的功效，常用于治疗腹泻下痢、尿路感染、小儿疳积、肝炎、肾炎等疾病，其化学成分主要有生物碱和黄酮两大类。生物碱是存在于生物体内的含氮有机化合物，大多数存在于植物中，目前已分离到三千余种，其中近百种具有很强的生理活性［1］。现代药理研究表明.freelg，用95％乙醇溶解后定容于50ml的容量瓶，摇匀，备用。2.2对照品溶液的配置移取“2.1”项下储备溶液5.00ml于50ml容量瓶，定容，摇匀，备用。2.3样品溶液的制备取叶下珠粉碎成粗粉，精确称取5g，加入0.5%的乙酸溶液200ml，浸泡24h，超声波

3、提取30min过滤，往滤液中加入氢氧化钠溶液至中性，过滤。沉淀用95％乙醇溶解后定容于50ml容量瓶中，备用。3结果3.1条件的优选3.1.1最大吸收波长的确定移取对照品溶液2.00ml，置于125ml的分液漏斗中，加入pH=7.5的磷酸盐缓冲液5.00ml，加入0.025%的溴麝香草酚蓝1.00ml，加入氯仿10.00ml，振摇1min，静置30min，分取氯仿层于具塞锥形瓶中，用无水氯化钙干燥5min，以5.00ml蒸馏水加pH=7.5的磷酸盐缓冲，加0.025%的麝香草酚蓝，加氯仿的萃取溶液作为参比，在36

4、0～550nm波长范围内进行扫描，结果显示溶液在415nm波长处有最大吸收。3.1.2pH值的确定移取对照品溶液2.00ml，按照“3.1.1”项下方法分别加入pH为6.0，6.5，7.0，7.5，8.0的磷酸盐缓冲液，结果显示：当加入的磷酸氢二钠与磷酸二氢钾的浓度分别为0.008mol/L和0.030mol/L（pH=7.5）时，溶液的吸光度最大，所以实验选择pH为7.5的磷酸盐缓冲溶液。3.1.3溴麝香草酚蓝用量的确定移取对照品溶液5.00ml，按照“3.1.1”项下方法分别加入0.025%的麝香草酚蓝1.0

5、0，2.00，3.00，4.00，5.00ml，结果显示，当加入的麝香草酚蓝体积为4.00ml时，溶液吸光度最大，所以实验选择溴麝香草酚蓝的用量为4.00ml。3.2标准曲线的绘制移取苦生碱对照品溶液1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml，置于125ml的分液漏斗中，加入二次蒸馏水至5.00ml，加入pH=7.5的磷酸盐缓冲液5.00ml，加入0.05%的溴麝香草酚蓝4.00ml，加入氯仿10.00ml，振摇1min，静置30min，分取氯仿层于具塞锥形瓶中，用无水氯化钙干燥5min，分别在415n

6、m波长处测定吸光度。以浓度(C)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程A=-0.0263+25.675C（r=0.99754），苦参碱检测浓度在0.004～0.02mg/ml范围内与吸光度有良好的线性关系。3.3稳定性实验移取对照品溶液2.00ml，按“3.1.1”项下方法在415nm波长处测定吸光度。并在室温下每隔1h测定1次吸光度，连续测定6次，结果表明，苦生碱与溴麝香草酚蓝的显色产物在6h内稳定，其RSD=1.65％。3.4精密度实验分别移取2.00ml对照品溶液3份，按“3.1.1”方法

7、在415nm波长处测定吸光度，RSD=1.2％。3.5加样回收实验移取样品溶液(广西武鸣样品)1.00ml，按照“3.1.1”方法测定总生物碱的含量。在样品溶液中加入3.00ml的苦参碱对照品溶液后测定吸光度，计算总生物碱含量，进行加样回收实验。平行测定3次。样品溶液体积1.00ml，生物碱平均含量0.05907mg，加入量0.06000mg，平均回收率98.65%，RSD=1.98%。3.6总生物碱的测定将6种不同产地来源的叶下珠药材粉，按照实验方法测定总生物碱含量。结果见表1。表1不同产地来源叶下珠中总生物碱

8、含量测定结果（略）4结论由于叶下珠中生物碱成分易溶于酸性溶液，因此采用0.5％醋酸作为提取液，结合超声波提取方法，可以保证药材中生物碱成分的完全提取。根据在一定pH介质中，生物碱类与氢离子生成阳离子，酸性染料在此条件下解离成阴离子，两者发生离子对反应，定量结合生成有色络合物，该络合物可被有机溶剂定量萃取的原理，本实验用苦参碱作为标准物质在pH=7.5的缓冲溶液中与溴麝香草