溴麝香草酚蓝比色法测定叶下珠生物碱的含量

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1、溴麝香草酚蓝比色法测定叶下珠生物碱的含量【关键词】溴麝香草酚蓝比色法叶下珠生物碱　　叶下珠(别名珍珠草)为大戟科叶下珠属中的一种草本植物，具有清肝明目、解毒消肿的功效，常用于治疗腹泻下痢、尿路感染、小儿疳积、肝炎、肾炎等疾病，其化学成分主要有生物碱和黄酮两大类。　　生物碱是存在于生物体内的含氮有机化合物，大多数存在于植物中，目前已分离到三千余种，其中近百种具有很强的生理活性［1］。现代药理研究表明，生物碱具有抗肿瘤、抗炎、抗心律失常等方面的作用［2,3］,其在医药和农药方面的应用已引起人们的广泛关注。　　对天然生物碱的生物活性、提取、精制、鉴定方法等方面的研究多见报道［

2、4］。目前总生物碱的含量测定有重量法、酸碱滴定法、分光光度法。考虑到生物碱的结构，本文采用酸性染料比色法，以苦参碱为对照品，对不同产地的叶下珠中的总生物碱进行了含量测定，建立了叶下珠中总生物碱含量的测定方法。　　1材料与仪器　　JP600型变辐杆式超声波萃取器（武汉嘉鹏电子有限公司）；916型紫外-可见分光光度计（澳大利亚GBC公司），分析天平（上海第三分析仪器厂），酸度计，苦参碱(中国药品生物制品检定所)，溴麝香草酚蓝和其余试剂均为分析纯。　　叶下珠，购自广西、云南、广东。　　2方法　　2.1储备溶液的配置精确称取苦参碱标准品10mg，用95％乙醇溶解后定容于50ml

3、的容量瓶，摇匀，备用。　　2.2对照品溶液的配置移取“2.1”项下储备溶液5.00ml于50ml容量瓶，定容，摇匀，备用。　　2.3样品溶液的制备取叶下珠粉碎成粗粉，精确称取5g，加入0.5%的乙酸溶液200ml，浸泡24h，超声波提取30min过滤，往滤液中加入氢氧化钠溶液至中性，过滤。沉淀用95％乙醇溶解后定容于50ml容量瓶中，备用。　　3结果　　3.1条件的优选　　3.1.1最大吸收波长的确定移取对照品溶液2.00ml，置于125ml的分液漏斗中，加入pH=7.5的磷酸盐缓冲液5.00ml，加入0.025%的溴麝香草酚蓝1.00ml，加入氯仿10.00ml，振摇

4、1min，静置30min，分取氯仿层于具塞锥形瓶中，用无水氯化钙干燥5min，以5.00ml蒸馏水加pH=7.5的磷酸盐缓冲，加0.025%的麝香草酚蓝，加氯仿的萃取溶液作为参比，在360～550nm波长范围内进行扫描，结果显示溶液在415nm波长处有最大吸收。　　3.1.2pH值的确定移取对照品溶液2.00ml，按照“3.1.1”项下方法分别加入pH为6.0，6.5，7.0，7.5，8.0的磷酸盐缓冲液，结果显示：当加入的磷酸氢二钠与磷酸二氢钾的浓度分别为0.008mol/L和0.030mol/L（pH=7.5）时，溶液的吸光度最大，所以实验选择pH为7.5的磷酸盐缓

5、冲溶液。　　3.1.3溴麝香草酚蓝用量的确定移取对照品溶液5.00ml，按照“3.1.1”项下方法分别加入0.025%的麝香草酚蓝1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml，结果显示，当加入的麝香草酚蓝体积为4.00ml时，溶液吸光度最大，所以实验选择溴麝香草酚蓝的用量为4.00ml。　　3.3稳定性实验移取对照品溶液2.00ml，按“3.1.1”项下方法在415nm波长处测定吸光度。并在室温下每隔1h测定1次吸光度，连续测定6次，结果表明，苦生碱与溴麝香草酚蓝的显色产物在6h内稳定，其RSD=1.65％。　　3.4精密度实验分别移取2.00ml对照品溶液3份

6、，按“3.1.1”方法在415nm波长处测定吸光度，RSD=1.2％。　　3.5加样回收实验移取样品溶液(广西武鸣样品)1.00ml，按照“3.1.1”方法测定总生物碱的含量。在样品溶液中加入3.00ml的苦参碱对照品溶液后测定吸光度，计算总生物碱含量，进行加样回收实验。平行测定3次。样品溶液体积1.00ml，生物碱平均含量0.05907mg，加入量0.06000mg，平均回收率98.65%，RSD=1.98%。　　3.6总生物碱的测定将6种不同产地的叶下珠药材粉，按照实验方法测定总生物碱含量。结果见表1。　　表1不同产地叶下珠中总生物碱含量测定结果（略）　　4结论　　

7、由于叶下珠中生物碱成分易溶于酸性溶液，因此采用0.5％醋酸作为提取液，结合超声波提取方法，可以保证药材中生物碱成分的完全提取。　　根据在一定pH介质中，生物碱类与氢离子生成阳离子，酸性染料在此条件下解离成阴离子，两者发生离子对反应，定量结合生成有色络合物，该络合物可被有机溶剂定量萃取的原理，本实验用苦参碱作为标准物质在pH=7.5的缓冲溶液中与溴麝香草酚蓝定量显色，从而求得叶下珠中总生物碱的含量。　　pH环境对显色反应影响显著。本实验中使苦参碱与溴麝香草酚蓝分别在pH为6.0，6.5，7.0，7.5，8.0的磷酸盐缓冲液中反应后测定吸光度