酸性染料比色法测定虎舌红中总生物碱的含量论文

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1、酸性染料比色法测定虎舌红中总生物碱的含量论文【摘要】目的建立测定虎舌红总生物碱的含量测定方法。方法采用溶剂萃取酸性染料比色法测定，以去氢飞廉碱（C16H22N4O2）为对照品，溴甲酚绿为酸性染料，用氯仿萃取，检测波长418nm。结果去氢飞廉碱在0.72～14.02mg/L范围内与吸光度呈良好线性关系，回归方程为：Y=19.254X-1.6247,r=0.9995(n=5)，平均回收率为101.65%，RSD为0.75%（n=5）。结论所建立方法简便、准确、选择性强。【关键词】虎舌红总生物碱；酸性染料比色法；

2、去氢飞廉碱Abstract：ObjectiveToestablishamethodforquantitativedeterminationofthetotalalkaloidsintherootofArdisiamamillata.MethodsThecontentinedbysolventextractionandaciddyecolorimetiy,ocresolgreenastheaciddye,andthe.ResultsAcanthoineRuscope-ineshog/L.Theregressi

3、onequationestablishedethodiseasy,accurateandspecific.KeyamillatatotalAlkaloid;AcidDyeColorimetiy;AcanthoineRuscope-ine虎舌红Ardisiamamillata.freelamillata）。去氢飞廉碱对照品（中国药品生物制品检定所）；溴甲酚绿（北京化工厂）；其它试剂均为分析纯。2方法与结果2.1供试液制备2.1.1供试品溶液的配制称取虎舌红粉末200g，用10倍量pH=3的75%乙醇分3次加热

4、回流提取，3h/次，得醇取液，60℃下减压浓缩得浸膏；用2%盐酸溶解，过滤除去不溶性非碱性脂溶性杂质，用乙醚、氯仿洗涤3次除去亲脂性非生物碱类成分，然后加浓氨水调pH值为6～7，过滤除去鞣质类杂质沉淀，再用氨水调pH至10～11后，用氯仿萃取，萃取液置50ml容量瓶中，用1mol·L-1醋酸钠调至pH值为5.5，摇匀，用pH5.5醋酸-醋酸钠缓冲液稀释至刻度，即得供试品溶液。2.1.2对照品溶液的配制精密称取去氢飞廉碱20mg，置50ml容量瓶中，加pH5.5醋酸-醋酸钠缓冲液溶解并稀释至刻度，得对照品贮备

5、液。精密吸取1ml贮备液置50ml容量瓶中，加上述缓冲液稀释至刻度，得对照品溶液。2.1.3酸性染料、缓冲溶液的配制酸性染料选择常用的溴甲酚绿或溴麝香草酚蓝，其溶液均按《中国药典》方法［4］配制。pH4.5，pH5.0，pH5.5，pH6.0醋酸-醋酸钠缓冲液均按文献方法配制。2.2实验条件的选择2.2.1测定波长的确定取对照品溶液、供试品溶液20μl置25ml具塞试管中，精密加入pH5.5醋酸-醋酸钠缓冲液3ml，溴甲酚绿染料2ml，氯仿10ml，密塞，剧烈振摇2min，转移至分液漏斗中静置2h，分取氯仿

6、层，于200～900nm之间进行波长扫描。结果表明，对照品溶液、虎舌红供试品提取液在418nm处吸收最强，最终选定418nm为检测波长，吸收光谱见图1。a虎舌红供试品溶液b对照品溶液图1供试品溶液、对照品溶液波长扫描图（略）2.2.2酸性染料用量的选择精密吸取对照品溶液1ml，分别精密加入0.3，0.6，0.9，1.2，1.5mg·ml-1的溴甲酚绿溶液2ml，其余同样品测定项下操作，结果表明在本实验条件下，酸性染料达0.9mg·ml-1时有最大吸收。2.2.3缓冲液pH值的选择取0.1mol·L-1醋

7、酸钠溶液与0.1mol·L-1醋酸溶液配制成pH值分别为4.5，5.0，5.5，6.0，6.5的缓冲液；精密吸取2ml对照品溶液，分别加入不同pH值的缓冲液3ml及其配制的溴甲酚绿溶液2ml，按样品测定项下操作。结果表明，当缓冲液pH值为5.5时，吸光度最大，即灵敏度最高。2.3线性范围的考察精密吸取对照品溶液（2.0g/L）0.0，5.0，10.0，15.0，20.0，25.0，30.0，35.0，40.0，45.0，50.0μl分别置于25ml具塞试管中，分别加入pH5.5醋酸-醋酸钠缓冲液3ml，酸性

8、染料溶液2ml，氯仿10ml，密塞，剧烈振摇2min，转移至分液漏斗中，静置2h，分取氯仿层于418nm测定吸光度。以去氢飞廉碱对照品浓度对吸光度进行线性回归，得回归方程：Y=19.254X-1.6247，r=0.9995（n=5）。结果表明，去氢飞廉碱在0.72～14.02mg/L范围内呈良好的线性关系。2.4精密度考察精密吸取同一供试品溶液5份，每份25μl，按照2.3项下的方法进行操作，测定吸光度，计算样品