比色法测定甘草中总皂苷的含量论文

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1、比色法测定甘草中总皂苷的含量论文【摘要】目的建立甘草中甘草总皂苷含量的测定方法。方法用香草醛高氯酸试剂，在589nm处有最大吸收，并对比色条件进行了优化。结果该法精密度高，1h内稳定，平均加样回收率为99.03%。结论此法简便、准确、稳定性、重复性好，可用于甘草总皂苷的测定。【关键词】甘草；总皂苷；香草醛高氯酸DeterminationofTotalSaponinsinGlycyrrhizabyColorimetryAbstract：ObjectiveToestablishthemethodofdeterminationoftotalsaponinsinGly

2、cyrrhiza.MethodsUseVanillinHClO4asthechromogenicreagentanddetectthemaximumabsorptionatthe.Choosethebestchromogenicpreparationtodeterminethecontentsofthesamples.ResultsTheprecisionofthemethodishigh.Thecolorofthetreatedsamplesethodissimple,accurate,highlysensitiveandreproducible.Itmayb

3、eusedforthequantitativedeterminationoftotalsaponinsinGlycyrrhiza.Keyinosae）甘草属（Glycyrrhiza）植物，为我国重要的传统中草药。甘草属植物在世界上共有30余种，我国有8种.freelg溶解于甲醇中定容至10ml，浓度为1mg·ml-1，甘草（购于黑龙江省大庆市大同区）。2方法2.1最大波长的确定准确吸取0.5ml标准品溶液，置于10ml具塞试管中，70℃水浴挥干溶剂，加入0.2ml的5%香草醛－冰醋酸溶液，再加入0.8ml的高氯酸，摇匀，于55℃水浴中加热20min，立即取出用流水

4、冷却至室温，加入冰醋酸5ml稀释，摇匀，以不加标准品的样品管为空白，于400～700nm波长处进行扫描。2.2比色条件的优化2.2.1最佳显色时间的确定取5份0.2ml对照品溶液，分别置具塞试管中，70℃水浴挥干溶剂，各加入0.2ml的5%香草醛－冰醋酸溶液，再加入0.8ml的高氯酸，摇匀，于60℃水浴中加热不同时间（5，10，15，20，25min），立即取出用冷水冷却至室温，加入冰醋酸5ml，摇匀，于最大吸收波长处测定其吸收值。2.2.2最佳显色温度的确定分别取5份0.2ml对照品溶液，依上法操作，在不同温度（50，55，60，65，70℃）水浴20min，同

5、上进行测定。2.3显色稳定性的考察精确吸取标准样溶液0.2ml，按2.1中的香草醛－高氯酸法显色，在1h内，每隔5min测定吸收值的变化情况。2.4标准曲线绘制精确吸取标准液0.1，0.15，0.2，0.25，0.3ml分别置于10ml具塞试管中，按2.1中的香草醛－高氯酸法显色后测定吸光值，每个浓度平行测定3次，以皂苷的质量为横坐标，吸光度为纵坐标作图得到回归方程。2.5样品待测液的制备准确称取脱脂后的甘草粉0.2g（40目）于10ml具塞试管中，准确加入甲醇4ml(含1%氨水)，加塞后放入超声波清洗器中超声1h，然后取出试管置于离心机中以3000r·min-1

6、离心15min，上清液作为待测液。2.6精密度的测定准确吸取待测液60μl共6份，按2.1中的香草醛－高氯酸法显色后测定吸收值。2.7加标回收率实验准确量取6份已知浓度的供试样品25μl，再分别加入标准溶液30μl，按2.1中的香草醛－高氯酸法显色后测定吸收值，计算加标回收率。2.8样品的测定吸取上述2.5项下提取纯化的3种样品溶液各60μl，按2.1中的香草醛－高氯酸法显色后测定吸收值，根据工作曲线计算皂苷含量。3结果与讨论3.1最大波长的确定香草醛－高氯酸是常用的一类显色剂，显色灵敏度高，试剂空白溶液色浅，常用作三萜皂苷的显色剂。其反应机理可能是皂苷在强氧化性

7、酸的作用下脱氢，氧化后再与香草醛加成。显色后，香草醛－高氯酸能与皂苷反应形成特征的紫红色。扫描结果表明，甘草酸单铵盐标准品溶液在589nm处有最大吸收，故选取589nm为测定波长。3.2比色条件的确定3.2.1最佳显色时间的确定结果见图1。3.2.2最佳显色温度的确定结果见图2。3.3显色的稳定性显色反应的1h内试样的吸光值下降较小（CV＝0.68%），在1h内测定的数据是基本稳定的，可以满足测定的要求。3.4标准曲线回归曲线数据见表1。表1测定的回归曲线数据（略）以3次测定的吸光值的平均值A为纵坐标，以甘草酸单铵盐量/mg为横坐标，绘制成标准曲线，如图3所示，该

8、标准曲线的