比色法测定峰胶中总黄酮含量

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1、科技伯tO科教前沿OSCIENCE&TECHNOLOGYINFORMATION2008年第5期比色法测定峰胶中总黄酮含量王立波(东营市产品质量监督检验所山东东营257091)【摘要】本文研究了萦外分光光度法浏定蜂胶胶盒中总黄酮的含童。当芦丁浓度在。.00816--0.04896mg/mL范围内，与吸收度呈良好线性关系，r=0.9999;平均回收率为99.00/0。比色法测定蜂胶胶盒中总黄酮的含蚤克服了传统方法需要使用液相色语仪等大型设备，操作复杂的缺点。本丈方法简单、快速、结果准确。【关键词I蜂胶;总黄酮;比色法，.实验

2、部分50.0340.01390.7991.2242.00598.599.02.281.1仪器与试药TU-1800紫外分光光度计(北京普析通用仪器60.0340.01350.7761.2242.005100.4有限责任公司);电子天平;水浴锅;超声波清洗器。芦丁对照品:中国药品生物制品检定所。其余试剂均为分析纯。1.2溶液的制备2.4精密度试验取同一批蜂胶胶囊样品，按供试品溶液的制备1.2.1对照品溶液的制备取经120℃干燥至恒重的芦丁对照品与测定法制备供试品溶液，重复进样测定5次，吸收度(A)的相对标准适量，精密称定，加

3、乙醇制成0.2mg/mL的溶液。偏差RSD为1.40%o1.2.2供试品溶液得制备取本品0.35g精密称定，置50.OmL容2.5稳定性试脸供试品溶液于制样后不同时间进样测定，结果量瓶中，加乙醇适量，超声处理(巧OW,50Hz)45rnin，取出，放冷，加乙见表30实验所得RSD为1.62%，说明供试品溶液在制样后30min内醇至刻度，播匀，即得。测定稳定。2.方法与结果表3供试品溶液的稳定性考察2.1测定波长的选择据药典及文献报道，蜂胶中主要含黄酮类测定时间152025soRSD(%)(而n)成分，可溶于甲醇、乙醇、醋

4、酸乙醋，故采用甲醇、乙醇、醋酸乙酣,75%乙醇,75%甲醇,60%乙醇作为提取溶剂进行考察。据药典介绍，芦丁吸收度(A)0.5210.5170.5060.5041.62最大吸收波长在500nm左右，故取各个样品溶液与芦丁对照品乙醇溶液，以不加样品(但需要加显色剂及NaOH试液)的乙醇溶液为空取蜂胶胶囊样品6批，按供试品溶液制备，精密量取续虑液5mL白，分别于300-600nm波长范围内进行扫描。结果见表to至25.OmL的量瓶中，加75%乙醇至10mL，照标准曲线制备项下的方表，不同提取溶剂的提取结果法，自“加5%亚硝酸

5、钠溶液1mL"起，依法操作，另量取乙醇lOmL至25.OmL的容量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加5%亚硝酸钠提取溶剂甲醇乙醉醋酸乙酷75%乙醉75%甲醉60%乙醇溶液1mL"起，依法操作;另精密量取供试滤液5ML至25.OmL容量瓶样品吸收378中，加氢氧化钠试液ion止，摇匀，加乙醇至刻度，摇匀，放置巧而n。作402DTI:501378493波长(nm)为样品空白，在波长501nm处，以试剂空白液校正基线，测定供试品芦丁吸收液与样品空白液吸收度，用供试品液吸收度减去样品空白液吸收度的503波长(nm)值代入回归

6、方程计算供试品溶液中总黄酮的量。结果见表40表4蜂胶胶班含f测定结果由表1可见，芦丁对照品在503nm波长处有最大吸收，样品(75%测定结果(m创拉)乙醇处理)在501nm波长处有最大吸收，考虑到操作误差及仪器因样品编号12素，故选择75%乙醇作为样品提取溶剂,501nm作为测定波长。2.2标准曲线的制备精密量取对照品溶液(浓度0.204mp/mL)124.922.023.51.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.OmL,置25.OmL容量瓶重，各加甲醇至6mL，加5%223.421.222.3亚硝酸钠溶液lml，摇

7、匀，放置burin，加10%硝酸铝溶液1mL，摇匀放置320.622.121.46min，加氢氧化钠试液IOML，摇匀，加乙醉至刻度，摇匀，放置15min，按紫外分光光度法(《中国药典》2000年版一部附录VA)，在波长501nm处420.220.120.2测定吸收度，以吸收度与其对应的浓度计算回归方程。回归方程C=521.221.421.32.4445x10-4+8.495x10-2A;r=0.9999，浓度在。.00816--0.04896m*加L范619.920.020.0围内，与吸收度呈良好线性关系。2.3加样回

8、收率试验精密称取已知含量的供试品(含量3.讨论5.74%)，精密加入对照品适量(三种不同水平，各两份)，按正文总黄酮3.1提取方法的考察取样品5份，按不同方法进行处理，结果见含量测定方法进行含量测定，计算回收率，其中吸收度已扣除样品空白吸收，结果见表20表So表5不同提取方法的提取结果裹2回收率侧定结果}提取方法!一