hplc法测定拟南芥中总黄酮含量的研究

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1、HPLC法测定拟南芥中总黄酮含量的研究张海军h2,郭丽王明泽车野李泽宇王殿奎(1洪龙江畨农业科学院大庆分院，黑龙江大庆163316:2吉林大学梢物科学学院，吉林长春130062)摘要：建立分析检测拟南芥中总黄酮含量的高效液相色谱法。色谱条件：PhenomenexC18色谱柱(150mmx4.6mm,5.0pm)；流动相：甲醇-0.4%磷酸水(35:65,v/v);流速：10mLmin"1,检测波长：256nm;杵温：35°C,进样量：10PL。试验建立的色谱条件，标准品芦丁在0.05〜1.60范围内，R2=0.9997,峰而积与质fi浓度呈现良好的线性关系；平均回收率为99.90%,R

2、SD小于3%(n=6)。该方法适用于拟南芥中总黄酮的检测。关键词：拟南芥；总黄酮含量；芦丁；高效液相色谱法DeterminationofTotalFlavonoidsContentinArabidopsisThalianabyHigh-PerformanceLiquidChromatographicZHANGHai-jun,GUOLi,WANGMing-ze,CHEYe,LIZe-yu，WANGDian-kui*('DaqingBranchesofHeilongjiangAcademyofAgriculturalSciences，Daqing163316,Heilongjiang，China;

3、^CollegeofPlantScience,JilinUniversity,Changchun130062,Jinlin，China)Abstract:TheobjectiveofthisstudywastoestablishamethodtodeterminetotalflavonoidscontentinArabidopsisThaliana.Themobilephaseconsistedonmethanol(A)/0.4%orthophosphoricacidindistrilledwater(B)andeachsolventwasfilteredthrougha0.45

4、impore

5、sizefilteranddegassedinanultrasonicbathbeforeuse.Theanalysisofrutinwasperformedat35°C(columnoventemperature)，withalOmL.min1flowrateandtheinjectionvolumewas10gL.SolventA:Bofrutinwas35:65%，andthechromatogramwasdetectedat256nm.Thepeakareahadagoodlinearitywithacorrelationcoefficientof0.9997，andtherecove

6、riesofstandardspilingwas99.90%withRSDlessthan3%.ThismethodwassuitablefordeterminationoftotalflavonoidsinArabidopsisThalianaandotherplants.Keywords:ArabidopsisThaliana.,Totalflavonoidscontent;Rutin;High-performanceliquidchromatographicmethod(HPLC)黄酮类化合物是植物屮苯丙氨酸代谢途径产生的重要生理活性物质，具科预防和治疗乳腺癌、结肠癌、皮肤癌、骨质疏松症

7、、妇女更年期综合症的功效，可提高机体免疫功能，降低心血管疾病和冠心病的发生［1"3］。高效的检测方法是黄酮类物质研发的基础，n前，关丁总黄酮的定呈检测方法冇紫外分光光度法和高效液相色谱法(HPLCf51等，主要集中于银杏叶'桑叶［7］、苦荞麦［8］、苦丁茶［9］、落叶松［1G］、百蕊草［11］、花椒［12］和罗汉果［13］等药川植物，侃对模式植物拟南芥的相关研究较少。目前，利用根瘤农朴荫把DNA转化进模式植物拟南芥难因组已是常规操作，其组织培养和梢株冉生研究也已成熟ll4j。本试验以芦丁为标准品，建立检测拟南芥屮总黄酮含景的HPLC法，旨在为深入研究(转基W)拟南芥屮总黄酮及相关产品的研究提供

8、一种技术参考，为后续的综合利用开发提供理论依据。基金项目：教冇部新教师基金资助项目(3M2101936604)o第一作奍简介：张海军，男，1986,山东济宁人，研究实习员，硕士，主要从事植物分子育种工作，在国内外刊物发表学术论文11篇，乳屮主笔7篇，申请专利1项。通讯地址：大庆岛新技术幵发区科技路黑龙江省农业科学院人庆分院，邮编：163316。Tel:13664663209，E-mail：zhan