春柴胡总黄酮含量及hplc指纹图谱研究

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1、春柴胡总黄酮含量及HPLC指纹图谱研究：李静，王博，张磊，潘璐琳，赵明，欧阳臻【摘要】目的：建立春柴胡总黄酮含量分析方法及黄酮类成分的高效液相色谱指纹图谱。方法：采用可见分光光度法测定总黄酮的含量，采用高效液相色谱法对不同采收期及不同部位春柴胡中黄酮类成分进行分析，建立春柴胡的指纹图谱。结果：4月到5月采收的春柴胡黄酮含量较高；总黄酮含量为叶＞全草＞茎＞根。应用“中药色谱指纹图谱相似度评价软件”生成了春柴胡药材的共有模式图，共有12个共有峰，各共有峰之间分离度较好，精密度、重复性和稳定性试验中各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3%，符合指纹图谱要求。结论：不同采收期

2、和不同药用部位春柴胡的黄酮类成分差异显著，本研究为春柴胡资源的综合利用开发提供了科学依据。【关键词】高效液相色谱；指纹图谱；总黄酮；春柴胡［Abstract］Objective:ToestablishthemethodoftotalflavonoidsandHPLCfingerprintinBupleurumscorzonerifoliumethods：Thecontentofflavonoidsinedetry，TheHPLCatogramofdifferentcollectionperiodandparts,ThefingerprintofBupleurumscorzone

3、rifoliumayandflavonoidscontent>root.ThestandardfingerprintofBupleurumscorzonerifolium”softonpeaksexistedinthefingerprintandeachpeakeasurementongdifferentcollectionperiodanddifferentpartsofBupleurumscorzonerifoliumETTLERAE240分析天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；台式冷冻高速离心机TGLL18K（江苏太仓华美生化仪器有限公司）。甲醇为色谱纯（江苏

4、汉邦科技有限公司），水为娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。芦丁（批号：100080-200306）、槲皮素（批号：0861-9901）、绿原酸（批号：0753-9708）、山柰素（批号：081-9003）、异鼠李素（批号：0860-0107）购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用。1.2春柴胡药材春柴胡药材采集于当地，见表1，均由镇江市药品检验所张林松主任中药师鉴定，药材均为Bupleurumscorzonerifoliuml锥形瓶中，精密加入70%乙醇15ml，在60℃条件下加热回流提取3次，每次1h，放冷，过滤，合并滤液，浓缩后用70%乙醇定容至25ml量瓶中，即得。1.

5、3.2对照品溶液的制备称取干燥的芦丁对照品0.0140g，精密称定，置50ml量瓶中，加适量甲醇，置水浴微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每1ml中含无水芦丁0.28mg)。1.3.3标准曲线绘制分别取经显色后的对照品溶液、样品溶液，在400～800nm波长范围内进行扫描，结果对照品溶液、样品溶液最大吸收波长均为510nm。取芦丁对照品溶液1,2,3,4,5,6ml(280μg/ml)，分别置25ml量瓶中，加水至6ml。加5%亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6min。加10%硝酸铝溶液1ml，混匀，放置6min。加NaOH试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15mi

6、n，在510nm下测定光密度D。以浓度C(μg/ml)为横坐标，光密度D为纵坐标，绘制标准曲线(D=0.0124×C-0.0145)。r=0.9999(n=6)，线性范围为11.2～67.2μg/ml。1.3.4精密度试验按照“1.3.1”项下的方法制备同一批供试液，按标准曲线制备方法显色，连续测定6次，测得光密度值的RSD为0.89%，说明仪器的精密度较好。1.3.5稳定性试验按照“1.3.1”项下的方法制备同一批供试液，按标准曲线制备方法显色，分别在0,5,10,20,30,60min测定光密度，RSD为1.90%，说明样品溶液在60min内稳定。1.3.6重复性试验按照“

7、1.3.1”项下的方法平行制备6份供试液，按标准曲线制备方法显色，并测定光密度，RSD为2.07%，说明方法的重复性较好。1.3.7加样回收率试验取已知总黄酮含量的样品6份各1g，精密称定，分别精密加入含芦丁10mg的对照品溶液，按照“1.3.1”项下的方法制备供试液并测定总黄酮含量，结果平均回收率为98.2%，RSD为1.25%。1.3.8样品测定取制备好的供试品溶液,按标准曲线制备方法显色,于510nm波长处测定光密度,由标准曲线求得总黄酮含量,结果见表2。表2样品中的总黄酮含量　　2H