高效液相色谱荧光紫外法测定动物肌肉组织中多类药物残留论文

《高效液相色谱荧光紫外法测定动物肌肉组织中多类药物残留论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、高效液相色谱荧光紫外法测定动物肌肉组织中多类药物残留论文李存江海洋吴银良王战辉赵思俊【摘要】建立了同时检测动物肌肉组织中9种喹诺酮类药物、7种磺胺类药物和甲氧苄啶的高效液相色谱检测方法。动物肌肉组织样品用磷酸盐缓冲液提取，HLB固相萃取柱净化，洗脱液用氮气吹至近干，磷酸盐缓冲液复溶，以甲酸水溶液乙腈体系为流动相，梯度洗脱，荧光紫外检测器串联测定。本方法的线性良好，相关系数r0.9987;平均回收率为70.6%～103.4%.freelides，SAs)都属于人工合成的抗菌药物，因其抗菌谱广而广泛用于预防和治疗食品动物的多种感染性疾病。甲氧苄啶(trimethoprim，TMP)作为一种

2、抗菌增效剂，可以增强QNs和SAs的抗菌作用，常与其配合使用1。这些药物在兽医临床广泛和大量的使用必然会导致其在动物性食品中的残留，严重危害人类的健康。我国和欧盟都已制定了多种QNs和SAs在动物组织中的最高残留限量2,3。QNs或SAs在动物组织中与高效液相色谱(HPLC)串联的检测方法主要有紫外法(UV)4～7、荧光法(FLU)8,9和质谱法(MS)10～12。国家标准中，检测猪和鸡组织中QNs残留的HPLC方法的检出限为20μg/kg13，SAs残留的HPLC方法的检出限为10～20μg/kg14。为提高检测效率，多类(multiclass)残留检测,即一个方法可以同时检测两类以上的药

3、物，已成为发展趋势15～17。但有些方法灵敏度较差17，或仪器价格昂贵不易推广应用16，或检测药物较少15,17，而且不能同时测定TMP15～17，甚至在提取和净化中使用大量的毒性高的有机溶剂，如使用氯制剂5,7,9。本研究建立了同时检测动物肌肉组织中9种QNs、7种SAs和TMP的HPLC检测方法。组织样品用磷酸盐缓冲液提取，固相萃取柱净化，方法简便、通用性强、有机溶剂用量少。2实验部分2.1仪器与试剂RP18(150mm×3.9mm，i.d.，5μm，美国P用UV检测器检测。3结果与讨论3.1色谱条件的选择由于结构和化学性质的差异，同时检测和分离两类以上结构不同药物对色谱条件要求较高。本研

4、究分别对多种型号和规格的色谱柱进行考察和比较，采用SymmetryShildTMRP18色谱柱可成功分离QNs、SAs和TMP。QNs和SAs均为两性化合物，流动相酸度对其分离影响很大，而且QNs在酸性溶液中有较强荧光发射18。本实验采用甲酸水溶液乙腈体系为流动相，对不同浓度甲酸的分离效果进行了比较，降低甲酸的浓度会导致QNs的色谱峰拖尾，而且3类药物不能完全分离，最终选择0.1%甲酸乙腈体系作为流动相。通常，SAs和TMP使用UV检测器，而QNs常使用FLU检测器，且不同的QNs的荧光光谱又相差较大。本实验采用常规的UV检测器串联程序波长FLU检测器测定样品，一次进样可以同时检测3类药物

5、，而且都能获得较高的灵敏度。程序FLU检测波长见2.2项。FLU和UV检测器各药物的色谱峰尖锐、对称(见图1)。图1标准品色谱图(a,d,g,j);猪肉添加色谱图(b,e);空白猪肉色谱图(c,f);鸡肉添加色谱图(h,k);空白鸡肉色谱图(i,.freel)1.甲氧苄啶(trimethoprim);2.麻保沙星(marbofloxacin);3.磺胺嘧啶(sulfadiazine);4.氧氟沙星(ofloxacin);5.磺胺吡啶(sulfapyridine);6.磺胺噻唑(sulfathiazole);7.环丙沙星(ciprofloxacin);8.洛美沙星(lomefloxacin);9

6、.单诺沙星(danofloxacin);10.恩诺沙星(enrofloxacin);11.磺胺二甲基嘧啶(sulfamethazine);12.沙拉沙星(sarafloxacin);13.磺胺间甲氧嘧啶(sulfamonomethoxine);14.磺胺甲噁唑(sulfamethoxazole);15.恶喹酸(oxolinicacid);16.磺胺苯酰(bensoylsulfanilamide);17.氟甲喹(flumequine)。3.2样品前处理条件的优化本研究试图减少毒性大的有机溶剂在提取和净化中的使用，磷酸盐缓冲液可以有效提取(氟)喹诺酮类药物8,19，但磷酸盐缓冲液提取组织样品中SA

7、s的方法报道很少15。本研究考察了不同组成、不同浓度、不同pH值的多种磷酸盐缓冲液的提取效果，最后确定采用K2HPO4KH2PO4缓冲液(pH=6.0)同时提取猪和鸡肌肉中的QNs,SAs和TMP，并对提取条件进行了优化，取得了满意的回收率，结果见表1。多类药物的残留分析方法常采用较复杂的前处理过程，本研究对多种固相萃取柱进行比较，最后采用单个HLB固相萃取柱同时净化QNs,SAs和TMP，获得