藤黄菌素体外对重组人蛋白激酶ck2全酶的抑制作用

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1、藤黄菌素体外对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用作者：林小聪，刘新光，陈小文，陈伟珠，梁念慈【关键词】酶动力学InhibitoryeffectofluteolinonrebinanthumanprotEinkinaseCK2holoenzymeinvitro　　【Abstract】AIM:ToobservetheinhibitoryeffectofluteolinonrebinanthumanprotEInkinaseCK2holoenzymeandtoconfirmtheinhibitorytypebyitsenzymekiicanalysisinvitro.METHODS:Rebi

2、nanthumanproteinkinaseCK2α′andβsubunitsixedatequalmolarratiotoreconstituteCK2holoenzyme.Luteolininhibitoryeffectiningtheradioactivityof32Pof［γ32P］ATPincorporatedintotheCK2substrateandCK2kiicanalysiseactivityofrebinanthumanproteinkinaseCK2ol/L.KiicstudiesofluteolinonrebinanthumanCK2shool/L)andcoo

3、perativeol/L).CONCLUSION:LuteolinisaneffectiveinhibitorofproteinkinaseCK2invitro.　　【Keye;luteolin;enzymekiics　　【摘要】目的：观察体外藤黄菌素对重组人蛋白激酶CK2的抑制效果及进行酶动力学分析以确定其抑制作用类型.方法：利用基因工程技术进行克隆、表达和纯化，获得重组人CK2的α′及β亚基,并在体外等摩尔混合构成CK2全酶.通过测定药物作用后转移到CK2底物上的［γ32P］ATP的32P的放射性活度来检测藤黄菌素对酶的抑制作用及采用Lineol/L）.酶动力学分析表明，藤黄菌素与

4、ATP呈竞争性抑制CK2的活性（Ki=0.19μmol/L）,与酪蛋白则呈混合性抑制CK2的活性（Ki=0.11μmol/L）.结论：藤黄菌素是一种较强的体外蛋白激酶CK2的抑制剂.　　【关键词】蛋白激酶CK2；重组蛋白；全酶；藤黄菌素；酶动力学　　0引言　　蛋白激酶CK2全酶是由2个催化亚基(α和/或α′)及2个调节亚基(β)所组成的异源四聚体，主要有α2β2,α′2β2或αα′β23种形式［1-2］，具有潜在的致瘤活性并与肿瘤的发生有着密切的联系［3］.藤黄菌素(luteolin)可能会影响CK2的活性，因此我们选择藤黄菌素作为研究对象，在已克隆、表达和纯化人CK2α′及β亚基的基

5、础上［4-5］，探讨其对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学，为进一步寻找新型的抗肿瘤和抗病毒药物奠定良好的基础.　　1材料和方法　　1．1材料藤黄菌素为Aldrich公司产品.组蛋白ⅢS，多聚谷氨酸和酪氨酸复合物［Poly(Glu∶Tyr)4∶1］，肝素，精胺和ATP购自Sigma公司.5，6二氯1β呋喃糖苯并咪唑(DRB)为Calbiochem公司产品.P81磷酸纤维素滤纸购自an公司.［γ32P］ATP为北京福瑞生物医学工程公司生产.　　1．2方法人CK2α′和β亚基cDNA重组质粒pTCKA′和pTCKB的克隆与测序见　　2．3在不同ATP浓度情况下藤黄菌素对CK2抑制

6、作用的酶动力学分析在固定酪蛋白浓度、改变ATP的浓度条件下，进行藤黄菌素对CK2的酶动力学研究.实验结果（图1）表明：在3种藤黄菌素浓度下，1/V对1/［S］作图的3个回归方程分别为：Y=0.237X+0.035，r2=0.936，P＜0.05（0μmol/L藤黄菌素）；Y=1.235X+0.032，r2=0.978，P＜0.05（1μmol/L藤黄菌素）；Y=3.542X+0.035，r2=0.998，P<0.01（2μmol/L藤黄菌素）.由此计算得出的相应表观Km分别为6.74，38.89和102.43μmol/L；相应表观Vmax分别为28.57，31.25和28.57/

7、nkat.由此可以看出，随着藤黄菌素浓度的增加，表观Km值增大，而表观Vmax值则基本不变，双倒数作图的交点于纵坐标上，因此藤黄菌素与ATP对重组人CK2活性的抑制作用动力学属于竞争性抑制，根据这些数据计算的抑制常数Ki=0.19μmol/L.　　图1不同ATP浓度情况下Lineol/L藤黄菌素）；Y=0.056X+0.063，r2=0.999，P<0.01（1μmol/L藤黄菌素）；Y=0.156X+0.134，r2=0.984，P＜0