c5位上羟基对染料木黄酮抑制重组人蛋白激酶ck2活性的影响

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1、C5位上羟基对染料木黄酮抑制重组人蛋白激酶CK2活性的影响：林小聪，刘新光，李春梅，陈小文【摘要】目的观察染料木黄酮C5位上的羟基对其抑制重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响。方法将利用基因工程技术获得的重组人CK2α’及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶。通过测定药物作用后转移到CK2底物上的［γ32P］ATP的32P的放射性活度，探讨染料木黄酮和大豆甙元对重组人CK2全酶活性的抑制作用，并采用半数效量概率单位法计算其IC50值。结果染料木黄酮和大豆甙元能明显抑制重组人CK2全酶活性，其IC50值分别是27.95μ

2、mol/L和2.38μmol/L，作用效果接近或者强于目前已知的CK2抑制剂N(2氨乙基)5氯萘1硫胺(A3)。结构效应分析表明：C5位上的羟基可减弱染料木黄酮对重组人CK2全酶的抑制作用。结论染料木黄酮和大豆甙元是两种有效的重组人CK2全酶的抑制剂。【关键词】蛋白激酶CK2；全酶；染料木黄酮；IC50　　【Abstract】ObjectiveToobservedtheeffectsof5hydroxylgroupofgenisteinonrebinanthumanproteinkinaseCK2holoe

3、nzymeactivity.MethodsRebinanthumanproteinkinaseCK2α’andβsubunitsixedintoreconstituteCK2holoenzyme.theeffectsof5hydroxylgroupofgenisteinonrebinanthumanproteinkinaseCK2holoenzymeactivityeactivityinaconcentrationdependentmannerol/L，respectively，orepotentthanprevio

4、uslyknoinoethy1)5chloronaphthalene1sulfonamide(A3).Structureactivitystudyindicatedthathydroxylgroupatposition5isdetrimentalpersefortheinhibitoryeffectsofgenisteinonCK2.ConclusionGenisteinanddaidzeinanproteinkinaseCK2invitro.　　【Keye;genistein;IC50　　蛋白激酶CK2是一

5、种高度保守的第二信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶。全酶是由两个催化亚基(α或α’)和两个调节亚基(β)组成的不均一四聚体(α2β2，α’2β2或αα’β2)［1，2］。CK2的α和α’基因是原癌基因［3］。在多种实体瘤细胞和白血病细胞中，CK2活性比相应的正常组织中高3～8倍［4，5］。转基因小鼠淋巴细胞中的CK2α亚基的失控表达可导致淋巴瘤，CK2α亚基与原癌基因cMyc共表达或在p53表达被改变条件下，CK2α基因的表达可促进急性淋巴细胞性白血病的发生［2］。此外，CK2与HIV1的生命周期关系十分密切，它可在H

6、IV1的复制、转录及裂解细胞等功能的调控中起重要作用，一些CK2抑制剂具有抗HIV1活性［6］。Sarno等［7］指出，CK2在寻找抗肿瘤及抗病毒药物方面是一个具有吸引力的分子靶点，其特异性抑制剂具有潜在的临床应用价值。黄酮类化合物具有抗炎、抗病毒、抗氧化、利胆、强心、镇痛和抗肿瘤等多种生物学活性并与蛋白激酶关系密切；多种黄酮类化合物能抑制蛋白激酶的活性［8］。染料木黄酮和大豆甙元作为两种结构非常相似的黄酮类化合物（结构式见图1），它们可能会影响CK2的活性。因此我们选择染料木黄酮和大豆甙元作为研究的对象，在已克隆

7、、表达和纯化人CK2α’及β亚基的基础上［9～11］，探讨其对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用，并观察C5位上的羟基对其抑制作用的影响，为进一步寻找新型的抗肿瘤和抗病毒药物奠定基础。　　图1染料木黄酮和大豆甙元的化学结构（略）　　　　材料与方法　　1.材料和试剂染料木黄酮和大豆甙元购自Aldrich公司；P81磷酸纤维素滤纸为ettlerToledo仪器上海有限公司产；LS6000SC型液闪计数仪为Beckman公司产；UV2100型分光光度计为尤尼柯上海仪器有限公司产。　　3.克隆、表达和纯化人CK2α’和β亚基

8、人CK2α’和β亚基cDNA重组质粒pTCKA'和pTCKB的克隆与测序见我们以前的报道［9，10］。重组人CK2α’和β亚基的原核表达、纯化与鉴定见我们以前的报道［9，11］。　　4.体外重组人CK2的蛋白定量按常规的考马斯亮蓝R250染色法，以牛血清白蛋白作为标准［12］。　　5.体外重组人CK2的活性测定酶反应总体积为35