c5位上羟基对染料木黄酮抑制重组人蛋白激酶ck2活性的影响

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1、C5位上羟基对染料木黄酮抑制重组人蛋白激酶CK2活性的影响作者：林小聪，刘新光，李春梅，陈小文【摘要】目的观察染料木黄酮C5位上的羟基对其抑制重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响。方法将利用基因工程技术获得的重组人CK2α’及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶。通过测定药物作用后转移到CK2底物上的［γ32P］ATP的32P的放射性活度，探讨染料木黄酮和大豆甙元对重组人CK2全酶活性的抑制作用，并采用半数效量概率单位法计算其IC50值。结果染料木黄酮和大豆甙元能明显抑制重组人CK2全酶活性，其I

2、C50值分别是27.95μmol/L和2.38μmol/L，作用效果接近或者强于目前已知的CK2抑制剂N(2氨乙基)5氯萘1硫胺(A3)。结构效应分析表明：C5位上的羟基可减弱染料木黄酮对重组人CK2全酶的抑制作用。结论染料木黄酮和大豆甙元是两种有效的重组人CK2全酶的抑制剂。【关键词】蛋白激酶CK2；全酶；染料木黄酮；IC50　　【Abstract】ObjectiveToobservedtheeffectsof5hydroxylgroupofgenisteinonrecombinan

3、thumanproteinkinaseCK2holoenzymeactivity.MethodsRecombinanthumanproteinkinaseCK2α’andβsubunitswhichwereabtainedbygenetic11engineeringtecnologyweremixedintoreconstituteCK2holoenzyme.theeffectsof5hydroxylgroupofgenisteinonrecombinanthumanproteinkinaseCK

4、2holoenzymeactivitywasstudybydetectingincorporationof32Pof［γ32P］ATP.ResultsGenisteinanddaidzeinwereshowntoinhibitobviouslyrecombinantCK2holoenzymeactivityinaconcentrationdependentmannerwithIC50valuesof27.95，2.38μmol/L，respectively，whichdisplayaclose

5、effectormorepotentthanpreviouslyknowninhibitorN(2aminoethy1)5chloronaphthalene1sulfonamide(A3).Structureactivitystudyindicatedthathydroxylgroupatposition5isdetrimentalpersefortheinhibitoryeffectsofgenisteinonCK2.ConclusionGenisteinanddaidzeinwe

6、retwoeffectiveinhibitorsofrecombinanthumanproteinkinaseCK2invitro.　　【Keywords】proteinkinaseCK2;holoenzyme;genistein;IC50　　蛋白激酶CK2是一种高度保守的第二信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶。全酶是由两个催化亚基(α或α’)和两个调节亚基(β)组成的不均一四聚体(α2β2，α’2β2或αα’β2)［1，2］。CK2的α和α’11基因是原癌基因［3］。在多种实体瘤细胞和白血病细胞中，

7、CK2活性比相应的正常组织中高3～8倍［4，5］。转基因小鼠淋巴细胞中的CK2α亚基的失控表达可导致淋巴瘤，CK2α亚基与原癌基因cMyc共表达或在p53表达被改变条件下，CK2α基因的表达可促进急性淋巴细胞性白血病的发生［2］。此外，CK2与HIV1的生命周期关系十分密切，它可在HIV1的复制、转录及裂解细胞等功能的调控中起重要作用，一些CK2抑制剂具有抗HIV1活性［6］。Sarno等［7］指出，CK2在寻找抗肿瘤及抗病毒药物方面是一个具有吸引力的分子靶点，其特异性抑制剂具有潜在的临床

8、应用价值。黄酮类化合物具有抗炎、抗病毒、抗氧化、利胆、强心、镇痛和抗肿瘤等多种生物学活性并与蛋白激酶关系密切；多种黄酮类化合物能抑制蛋白激酶的活性［8］。染料木黄酮和大豆甙元作为两种结构非常相似的黄酮类化合物（结构式见图1），它们可能会影响CK2的活性。因此我们选择染料木黄酮和大豆甙元作为研究的对象，在已克隆、表达和纯化人CK2α’及β亚基的基础上［9～11］，探讨其对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用，并观察C5位上的羟基对其抑制作用的影响，为进一步寻找新型的抗肿瘤和抗病毒药物奠