基于蛋白激酶ck2α的高通量药物筛选

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1、万方数据中图分类号：UDC：学校代码：10055密级：公开薏蕊夫浮硕士学位论文基于蛋白激酶CK2(x的高通量药物筛选High··ThroughputScreeningofInhibitorsforCK2a论文作者睦差椹申请学位理堂亟±学科专业生塑丝堂皇岔王生物堂答辩委员会主席蓥医塞指导教师娄蟹勇副塾援培养单位生金抖堂堂院研究方向生物医药评阅人拯遮处洼南开大学研究生院二。一四年五月万方数据南开大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本

2、学位论文的研究成果不包含任何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的作品的内容。对本论文所涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本学位论文原创性声明的法律责任由本人承担。学位论文作者签名：年月日非公开学位论文标注说明(本页表中填写内容须打印)根据南开大学有关规定，非公开学位论文须经指导教师同意、作者本人申请和相关部门批准方能标注。未经批准的均为公开学位论文，公开学位论文本说明为空白。论文题目申请密级口限制(≤2年)口秘密(≤10年)口机密(s20年)保密期限年月至年月审批表编号批准日期年月日南

3、开大学学位评定委员会办公室盖章(有效)注：限制★2年《可少于2年)；秘密*iO年(可少于10年)；机密★20年(可少于20年)万方数据南开大学学位论文使用授权书根据<南开大学关于研究生学位论文收藏和利用管理办法》，我校的博士、硕士学位获得者均须向南开大学提交本人的学位论文纸质本及相应电子版。本人完全了解南开大学有关研究生学位论文收藏和利用的管理规定。南开大学拥有在《著作权法》规定范围内的学位论文使用权，即：(1)学位获得者必须按规定提交学位论文(包括纸质印刷本及电子版)，学校可以采用影印、缩印或其他复制手段保存研究生学位

4、论文，并编入《南开大学博硕士学位论文全文数据库》；(2)为教学和科研目的，学校可以将公开的学位论文作为资料在图书馆等场所提供校内师生阅读，在校园网上提供论文目录检索、文摘以及论文全文浏览、下载等免费信息服务；(3)根据教育部有关规定，南开大学向教育部指定单位提交公开的学位论文：(4)学位论文作者授权学校向中国科技信息研究所及其万方数据电子出版社和中国学术期刊(光盘)电子出版社提交规定范围的学位论文及其电子版并收入相应学位论文数据库，通过其相关网站对外进行信息服务。同时本人保留在其他媒体发表论文的权利。非公开学位论文，保密

5、期限内不向外提交和提供服务，解密后提交和服务同公开论文。论文电子版提交至校图书馆网站：http：N202．113．20．161：8001／index．htm。本人承诺：本人的学位论文是在南开大学学习期间创作完成的作品，并已通过论文答辩；提交的学位论文电子版与纸质本论文的内容一致，如因不同造成不良后果由本人自负。本人同意遵守上述规定。本授权书签署一式两份，由研究生院和图书馆留存。作者暨授权人签字：南开大学研究生学位论文作者信息年月日论文题目基于蛋白激酶CK20t的高通量药物筛选姓名陆美棋学号2120110962答辩日期20

6、14年5月22日论文类别博士口学历硕士团硕士专业学位口高校教师口同等学力硕士口院／系／所生命科学学院专业生物化学与分子生物学联系电话13820674159EmailLumeiqi88@126．com通信地址(邮编)：天津经济技术开发区洞庭路220号备注：是否批准为非公开论文否注：本授权书适用我校授予的所有博士、硕士的学位论文。由作者填写(一式两份)签字后交校图书馆，非公开学位论文须附《南开大学研究生申请非公开学位论文审批表》。万方数据摘要蛋白激酶CK2广泛分布于真核细胞之中，是一种高度保守性的丝／苏氨酸蛋白激酶，包含有两

7、个催化亚基(a／a’)与调节亚基(B)。有相关的研究已表明蛋白激酶CK2在细胞周期、分化与增殖过程中发挥重要作用，亦能调控一些肿瘤抑制蛋白、原癌基因的活性与稳定性，在许多肿瘤细胞中都发现CK2的活性升高或是被激活。还有相关研究表明CK2可以通过磷酸化促细胞凋亡蛋白来抑制细胞凋亡，以阻止凋亡调控。因此，降低CK2的活性或使用小分子抑制剂来抑制其活性，能够减少体内癌细胞的生长。本研究以催化亚基CK2a作为分子靶点，从分子克隆构建重组质粒开始，通过尝试不同的表达宿主，最终发现在大肠杆菌E．coliBL21(DE3)表达宿主中可

8、以获得表达量较高的可溶性蛋白激酶CK2a；重组蛋白经金属离子亲和层析及离子交换层析技术进行分离纯化，得到了较高纯度的蛋白，并采用分光光度法测定其活性，建立了稳定的酶活体系(Z．因子=0．74)；然后采用高通量药物筛选技术手段对化合物库中500余种化合物进行筛选，共筛选出了7个抑制率较高的化合物，抑制效果最好的IC50