藤黄菌素对人白血病细胞系hl60体外增殖的影响

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1、藤黄菌素对人白血病细胞系HL60体外增殖的影响作者：陈伟珠，林小聪，刘新光【关键词】藤黄菌素；白血病细胞系；增殖；细胞周期　　［摘要］目的：观察藤黄菌素对HL60细胞体外增殖的抑制作用及其对细胞周期的影响。方法：分别采用台盘蓝拒染法及流式细胞术，在不同条件下测定细胞增殖的抑制率及细胞周期的分布。结果：应用台盘蓝拒染法，藤黄菌素能够显著地抑制HL60细胞的体外增殖并且呈现时效及量效关系。流式细胞术的结果表明：藤黄菌素作用2h可使HL60细胞的细胞周期分别阻滞于G2/M期和G0/G1期。结论：藤黄菌素能够明显抑制HL60细胞体外增殖。　

2、　［关键词］藤黄菌素；白血病细胞系；增殖；细胞周期　　EffectofLuteolinonProliferationofHumanLeukemicCellHL60inVitro　　Abstract:ObjectiveToobservedtheinfluenceofluteolinonproliferationandcellcycleofhumanleukemiccellHL60invitro.MethodsThecellgroetryinthevariousconditions.ResultsUsingthetrypanbluest

3、ainassaye,themoreobviouseffects.Floetryanalysisshoiccell;Proliferation;Cellcycle　　藤黄菌素（结构式见图1）是从龙胆科植物湿生蕾中所提取的一种黄酮类化合物，具有抗炎、抗氧化、抗病毒、抗肿瘤等多种生物学和药学作用［1,2］。许多研究表明藤黄菌素对多种肿瘤细胞均有抑制作用，如乳腺癌、前列腺癌以及黑色素瘤等［1,3,4］。为此，本实验选用藤黄菌素研究其对HL60细胞体外增殖及细胞周期的影响，为进一步探讨黄酮类化合物在体内的抗癌作用机制提供实验依据。藤黄菌素（3

4、',4',5,7四羟基黄酮）　　1材料与方法　　1．1　材料　　1．1．1　试剂　　　　藤黄菌素为Sigma公司产品，纯度99%。RPMI1640培养基为Gibco公司产品。超级新生牛血清购自杭州四季青公司。二甲基亚砜(DMSO)和二甲基甲酰胺(DMF)为Amresco公司产品。十二烷基硫酸钠(SDS)为Biomol公司生产。四噻唑蓝(MTT)为Sigma公司产品。其他所用试剂均为国产分析纯试剂。　　1．1．2　仪器　　　　美国Precision公司生产的La5410型CO2孵箱，美国BioRad公司生产的450型酶标免疫测定仪,美

5、国Coulter公司生产的EpicsX2型流式细胞仪。　　1．1．3　细胞系　　　　人早幼粒细胞白血病HL60细胞系购自中国科学院上海细胞生物所。　　1．2　方法　　1．2．1　细胞培养　　　　人早幼粒细胞白血病HL60细胞系培养于含有10%灭活的超级新生牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI1640完全培养基中，37℃、5%CO2饱和湿度孵箱中孵育。　　1．2．2　台盘蓝拒染法检测细胞增殖　　　　取对数生长期的HL60细胞，调整细胞浓度为1.0×105/ml～2.0×105/ml，直接加入24孔板，每孔1m

6、l，用药组加入1μl不同浓度的药物，每组设3个平行孔，并设对照孔。细胞加药后置于37℃、5%CO2饱和湿度孵箱中孵育，然后按1∶10（V/V）加入0.4%的台盘蓝，染色2min～3min，在光学显微镜下做活细胞记数。药物对细胞增殖的抑制率(IR)按照公式：IR=（1-用药组平均活细胞数/对照组平均活细胞数）×10%计算。半抑制浓度(IC50)的计算根据半数效量概率单位法进行。以浓度的对数为横坐标，相应浓度抑制率的概率单位(probit)为纵坐标，求出直线回归方程，并根据方程计算IC50值(50%抑制时的概率单位为5)。　　1．2．3

7、　流式细胞术检测细胞周期　　　　收集HL60细胞，调整细胞浓度为0.5×106/ml～1.0×106/ml，分装于6孔板中，每孔1ml，用药组加入1μl不同浓度的药物，每组设3个平行孔，并设对照孔。细胞加药后37℃、5%CO2保温2h。1000r/min离心5min收集细胞。PBS洗1次后，在沉淀中加入冰预冷的70%乙醇4℃固定12h以上。上机前1000r/min离心5min，弃固定液，再用PBS洗一次，加入碘化丙啶(PI)染液500μl（含50μg/mlPI，100μg/mlRnaseA），室温于避光处染色30min。经100目尼

8、龙网过滤后，在流式细胞仪上测定DNA的含量，计算细胞周期的百分比。　　1．2．4　统计学处理　　　　以SPSS11.0软件做统计学数据处理，实验结果用±s表示，多组资料采用oneol/L～80μmol/L的藤黄菌素作用后，HL60细胞