藤黄菌素对人白血病细胞系hl60体外增殖的影响

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1、藤黄菌素对人白血病细胞系HL60体外增殖的影响作者:陈伟珠,林小聪,刘新光【关键词】藤黄菌素;白血病细胞系;增殖;细胞周期  [摘要]目的:观察藤黄菌素对HL60细胞体外增殖的抑制作用及其对细胞周期的影响。方法:分别采用台盘蓝拒染法及流式细胞术,在不同条件下测定细胞增殖的抑制率及细胞周期的分布。结果:应用台盘蓝拒染法,藤黄菌素能够显著地抑制HL60细胞的体外增殖并且呈现时效及量效关系。流式细胞术的结果表明:藤黄菌素作用2h可使HL60细胞的细胞周期分别阻滞于G2/M期和G0/G1期。结论:藤黄菌素能够明显抑制HL60细胞体外增殖。 

2、 [关键词]藤黄菌素;白血病细胞系;增殖;细胞周期  EffectofLuteolinonProliferationofHumanLeukemicCellHL60inVitro  Abstract:ObjectiveToobservedtheinfluenceofluteolinonproliferationandcellcycleofhumanleukemiccellHL60invitro.MethodsThecellgroetryinthevariousconditions.ResultsUsingthetrypanbluest

3、ainassaye,themoreobviouseffects.Floetryanalysisshoiccell;Proliferation;Cellcycle  藤黄菌素(结构式见图1)是从龙胆科植物湿生蕾中所提取的一种黄酮类化合物,具有抗炎、抗氧化、抗病毒、抗肿瘤等多种生物学和药学作用[1,2]。许多研究表明藤黄菌素对多种肿瘤细胞均有抑制作用,如乳腺癌、前列腺癌以及黑色素瘤等[1,3,4]。为此,本实验选用藤黄菌素研究其对HL60细胞体外增殖及细胞周期的影响,为进一步探讨黄酮类化合物在体内的抗癌作用机制提供实验依据。藤黄菌素(3

4、',4',5,7四羟基黄酮)  1材料与方法  1.1 材料  1.1.1 试剂    藤黄菌素为Sigma公司产品,纯度99%。RPMI1640培养基为Gibco公司产品。超级新生牛血清购自杭州四季青公司。二甲基亚砜(DMSO)和二甲基甲酰胺(DMF)为Amresco公司产品。十二烷基硫酸钠(SDS)为Biomol公司生产。四噻唑蓝(MTT)为Sigma公司产品。其他所用试剂均为国产分析纯试剂。  1.1.2 仪器    美国Precision公司生产的La5410型CO2孵箱,美国BioRad公司生产的450型酶标免疫测定仪,美

5、国Coulter公司生产的EpicsX2型流式细胞仪。  1.1.3 细胞系    人早幼粒细胞白血病HL60细胞系购自中国科学院上海细胞生物所。  1.2 方法  1.2.1 细胞培养    人早幼粒细胞白血病HL60细胞系培养于含有10%灭活的超级新生牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI1640完全培养基中,37℃、5%CO2饱和湿度孵箱中孵育。  1.2.2 台盘蓝拒染法检测细胞增殖    取对数生长期的HL60细胞,调整细胞浓度为1.0×105/ml~2.0×105/ml,直接加入24孔板,每孔1m

6、l,用药组加入1μl不同浓度的药物,每组设3个平行孔,并设对照孔。细胞加药后置于37℃、5%CO2饱和湿度孵箱中孵育,然后按1∶10(V/V)加入0.4%的台盘蓝,染色2min~3min,在光学显微镜下做活细胞记数。药物对细胞增殖的抑制率(IR)按照公式:IR=(1-用药组平均活细胞数/对照组平均活细胞数)×10%计算。半抑制浓度(IC50)的计算根据半数效量概率单位法进行。以浓度的对数为横坐标,相应浓度抑制率的概率单位(probit)为纵坐标,求出直线回归方程,并根据方程计算IC50值(50%抑制时的概率单位为5)。  1.2.3

7、 流式细胞术检测细胞周期    收集HL60细胞,调整细胞浓度为0.5×106/ml~1.0×106/ml,分装于6孔板中,每孔1ml,用药组加入1μl不同浓度的药物,每组设3个平行孔,并设对照孔。细胞加药后37℃、5%CO2保温2h。1000r/min离心5min收集细胞。PBS洗1次后,在沉淀中加入冰预冷的70%乙醇4℃固定12h以上。上机前1000r/min离心5min,弃固定液,再用PBS洗一次,加入碘化丙啶(PI)染液500μl(含50μg/mlPI,100μg/mlRnaseA),室温于避光处染色30min。经100目尼

8、龙网过滤后,在流式细胞仪上测定DNA的含量,计算细胞周期的百分比。  1.2.4 统计学处理    以SPSS11.0软件做统计学数据处理,实验结果用±s表示,多组资料采用oneol/L~80μmol/L的藤黄菌素作用后,HL60细胞

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1、藤黄菌素对人白血病细胞系HL60体外增殖的影响作者:陈伟珠,林小聪,刘新光【关键词】藤黄菌素;白血病细胞系;增殖;细胞周期  [摘要]目的:观察藤黄菌素对HL60细胞体外增殖的抑制作用及其对细胞周期的影响。方法:分别采用台盘蓝拒染法及流式细胞术,在不同条件下测定细胞增殖的抑制率及细胞周期的分布。结果:应用台盘蓝拒染法,藤黄菌素能够显著地抑制HL60细胞的体外增殖并且呈现时效及量效关系。流式细胞术的结果表明:藤黄菌素作用2h可使HL60细胞的细胞周期分别阻滞于G2/M期和G0/G1期。结论:藤黄菌素能够明显抑制HL60细胞体外增殖。 

2、 [关键词]藤黄菌素;白血病细胞系;增殖;细胞周期  EffectofLuteolinonProliferationofHumanLeukemicCellHL60inVitro  Abstract:ObjectiveToobservedtheinfluenceofluteolinonproliferationandcellcycleofhumanleukemiccellHL60invitro.MethodsThecellgroetryinthevariousconditions.ResultsUsingthetrypanbluest

3、ainassaye,themoreobviouseffects.Floetryanalysisshoiccell;Proliferation;Cellcycle  藤黄菌素(结构式见图1)是从龙胆科植物湿生蕾中所提取的一种黄酮类化合物,具有抗炎、抗氧化、抗病毒、抗肿瘤等多种生物学和药学作用[1,2]。许多研究表明藤黄菌素对多种肿瘤细胞均有抑制作用,如乳腺癌、前列腺癌以及黑色素瘤等[1,3,4]。为此,本实验选用藤黄菌素研究其对HL60细胞体外增殖及细胞周期的影响,为进一步探讨黄酮类化合物在体内的抗癌作用机制提供实验依据。藤黄菌素(3

4、',4',5,7四羟基黄酮)  1材料与方法  1.1 材料  1.1.1 试剂    藤黄菌素为Sigma公司产品,纯度99%。RPMI1640培养基为Gibco公司产品。超级新生牛血清购自杭州四季青公司。二甲基亚砜(DMSO)和二甲基甲酰胺(DMF)为Amresco公司产品。十二烷基硫酸钠(SDS)为Biomol公司生产。四噻唑蓝(MTT)为Sigma公司产品。其他所用试剂均为国产分析纯试剂。  1.1.2 仪器    美国Precision公司生产的La5410型CO2孵箱,美国BioRad公司生产的450型酶标免疫测定仪,美

5、国Coulter公司生产的EpicsX2型流式细胞仪。  1.1.3 细胞系    人早幼粒细胞白血病HL60细胞系购自中国科学院上海细胞生物所。  1.2 方法  1.2.1 细胞培养    人早幼粒细胞白血病HL60细胞系培养于含有10%灭活的超级新生牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI1640完全培养基中,37℃、5%CO2饱和湿度孵箱中孵育。  1.2.2 台盘蓝拒染法检测细胞增殖    取对数生长期的HL60细胞,调整细胞浓度为1.0×105/ml~2.0×105/ml,直接加入24孔板,每孔1m

6、l,用药组加入1μl不同浓度的药物,每组设3个平行孔,并设对照孔。细胞加药后置于37℃、5%CO2饱和湿度孵箱中孵育,然后按1∶10(V/V)加入0.4%的台盘蓝,染色2min~3min,在光学显微镜下做活细胞记数。药物对细胞增殖的抑制率(IR)按照公式:IR=(1-用药组平均活细胞数/对照组平均活细胞数)×10%计算。半抑制浓度(IC50)的计算根据半数效量概率单位法进行。以浓度的对数为横坐标,相应浓度抑制率的概率单位(probit)为纵坐标,求出直线回归方程,并根据方程计算IC50值(50%抑制时的概率单位为5)。  1.2.3

7、 流式细胞术检测细胞周期    收集HL60细胞,调整细胞浓度为0.5×106/ml~1.0×106/ml,分装于6孔板中,每孔1ml,用药组加入1μl不同浓度的药物,每组设3个平行孔,并设对照孔。细胞加药后37℃、5%CO2保温2h。1000r/min离心5min收集细胞。PBS洗1次后,在沉淀中加入冰预冷的70%乙醇4℃固定12h以上。上机前1000r/min离心5min,弃固定液,再用PBS洗一次,加入碘化丙啶(PI)染液500μl(含50μg/mlPI,100μg/mlRnaseA),室温于避光处染色30min。经100目尼

8、龙网过滤后,在流式细胞仪上测定DNA的含量,计算细胞周期的百分比。  1.2.4 统计学处理    以SPSS11.0软件做统计学数据处理,实验结果用±s表示,多组资料采用oneol/L~80μmol/L的藤黄菌素作用后,HL60细胞

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