浅蓝菌素脂质体的制备及其对肿瘤细胞体外增殖影响的研究论文

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1、浅蓝菌素脂质体的制备及其对肿瘤细胞体外增殖影响的研究论文【摘要】目的制备浅蓝菌素脂质体并研究其对HER2/neu(erbB2)原癌基因过表达肿瘤细胞株体外增殖的影响。方法采用超声薄膜分散法制备浅蓝菌素脂质体；正交设计优化处方；HPLC法测定药物包封率及脂质体中药物浓度；离心加速实验及冷藏实验考察脂质体稳定性；活细胞计数法测定细胞生长曲线；MTT法测定游离浅蓝菌素及浅蓝菌素脂质体对细胞的增殖抑制作用。结果浅蓝菌素脂质体的平均粒径为134.3nm，稳定性良好，最佳处方条件下药物包封率为(53.45±

2、3.67)%，脂质体中药物质量浓度为(1.126±0.065)mg/mL，剂量依赖性抑制SKBr3和SKOv3细胞的增殖，IC50分别为9.62和9.32μmol·L-1。结论该制备工艺和处方可行，所制备的浅蓝菌素脂质体对SKBr3细胞和SKOv3细胞有明显的增殖抑制作用，且作用强于游离浅蓝菌素。【关键词】浅蓝菌素脂质体包封率肿瘤细胞IC50Abstract:ObjectiveTooptimizethepreparationofceruleniniposomesandinvestigate

3、theeffectofceruleninliposomesonproliferationoftumorcellsoverexpressingHER2/neuinvitro.MethodsCeruleninembeddedinliposomesbeddingrateofceruleninesesentanddeepfreezing.ThegroesatdifferentconcentrationsinedbycountingthecellnumberandIC50ofceruleninliposo

4、mesinedbyMTTmethod.ResultsTheaveragediameterofceruleninliposomesbeddingrateofceruleninintoliposomesesg/mL.TheliposomesinhibitedthegroannerandtheIC50ofceruleninliposomesonSKBr3andSKOv3cellsol/Lrespectively.ConclusionTheceruleninliposomesthatodifiedfo

5、rmulationinhibitedtheproliferationofSKBr3andSKOv3cellsinvitroes;embeddingrate;tumorcells;IC50近年来研究发现脂肪酸合成酶(FAS)在多种恶性肿瘤如乳腺癌、卵巢癌中呈高表达.freelg/mL）、毒副作用较强，且化学性质不稳定。研究表明，脂质体作为药物载体可以有效地降低毒副作用，且免疫脂质体可以将药物靶向释放到靶分子［7］。本研究制备了浅蓝菌素脂质体(CEL)，对其稳定性进行考察；并以HER2/neu(e

6、rbB2)过表达的肿瘤细胞株SKBr3和SKOv3为实验对象，考察CEL对细胞体外增殖的影响。1材料与方法1.1仪器与试剂SHIMADZULC10ATvp高效液相色谱仪(日本岛津)；C18ODS分析柱(DiamonsilTM,5μm,150mm×4.6mm，北京迪马科技有限公司)；REVCO3000细胞培养箱(美国REVCO公司)；Model312分光光度平板读数计(BiotechResearchLaboratoriesInc.)；RE52旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；BI90型激

7、光粒度分析仪(BrookhevenCo.,USA)；SIGMA3K18低温高速离心机（德国SIGMA公司）；JY250探头式超声仪(浙江三门超声波仪器厂)。浅蓝菌素(SigmaInc.,纯度98％)；胆固醇(上海生物化学试剂公司)；大豆卵磷脂(上海油脂一厂)；MEM培养基(HycloneTM,ThermoFisherScientificInc.)；胎牛血清(FBS，杭州四季青生物工程材料有限公司)；非必需氨基酸(AmrescoInc.,USA)；胰蛋白酶(AmrescoInc.,USA)；甲醇(

8、色谱纯，天津南开化学试剂有限公司)；MTT(SigmaInc.)；其余试剂均为国产分析纯。1.2细胞培养SKBr3乳腺癌细胞株和SKOv3卵巢癌细胞株购自于中国医学科学院肿瘤研究所(ATCCnumber分别为HTB30TM和HTB77TM)。常规培养于含10%胎牛血清、2mmol·L-1L谷氨酰的改良MEM培养基中。培养条件：5%CO2、95%湿度、37℃。每周传代2次。待细胞基本长满后，弃去旧培养基，以适量0.25%胰蛋白酶和0.02%EDTA(体积比为1∶1)将细胞消