银杏叶药材中银杏酸含量的高效液相法测定

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1、银杏叶药材中银杏酸含量的高效液相法测定　　银杏酚酸广泛存在于银杏的根、梗、叶、果和外种皮中，它可看作是6－烷基或6－烯基水杨酸的衍生物，根据侧链碳原子数目及单双键的不同主要有白果新酸(C13∶0)、白果酸(C15∶1)、十七烷二烯银杏酸(C17∶2)、氢化白果酸(C15∶0)、十七烷一烯银杏酸(C17∶1)等5种［1］。研究表明，银杏酚酸具有生物学毒性，有抗炎、抗过敏、抑菌及防治病虫害等作用［2］，是当前国际上治疗心脑血管疾病药物。国际上规定，银杏叶提取物中银杏酚酸的含量必须低于5μg/g。因此，建立准确的银杏酸分析方法显得尤其重要。银杏酚酸的分析一般用高效液相色谱法

2、［3］和高效液相质谱联用法［4］，也有用分光光度计分析的报道［5］。本实验采用简单的预处理方法，建立了银杏叶药材中所含有的全部银杏酸的HPLC测定方法，为银杏叶提取物及其制剂的质量监控和安全性评价提供参考。　　1仪器与试药　　1．1仪器　　美国Agilent1100高效液相色谱仪、超声波清洗机(HS20500D)、天平(AB204－S)。　　1．2试药　　白果新酸对照品(中国生物制品鉴定所，批号:110713－200609)，总银杏酸对照品(中国生物制品鉴定所，批号:110713－200609)，甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为娃哈哈纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司)。　　

3、2色谱条件　　PntulipsBP－C18(4．6250mm，5μm)柱，检测波长:310nm，流动相:甲醇1%冰醋酸(95:5)，流速:1．0ml/min，柱温:30℃。理论板数按白果新酸峰计算应不低于4000。　　3线性关系考察及检测限、定量限　　3．1标准溶液的制备　　分别称取白果新酸、总银杏酸对照品适量，加甲醇溶液分别制成0.426mg/ml、0.292mg/ml的白果新酸、总银杏酸的对照品溶液。　　3．2标准曲线的绘制　　分别精密吸取白果新酸对照品溶液0.4、0.9、1.4、1.9、2.4μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积值，以峰面积(A)对进样量(C

4、)，进行线性回归，得白果新酸性回归方程:y=475634x+1.425，r2=0.9999，线性范围0.1704～1.0224μg。　　分别精密吸取总银杏酸对照品2、4、6、8、10μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积值，以峰面积(A)对进样量(C)，进行线性回归，得总银杏酸线性回归方程:y=376918x+7．86，r2=0.9996，线性范围0.584～2.92μg。说明在此线性范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系。结果见表1、表2。　　　　3．3检测限和定量限　　以白果新酸测定检测限和定量限。结果检测限(信噪比3∶1):检测浓度为0.0006mg/ml

5、;定量限(信噪比10∶1):检测浓度为0.0020mg/ml。　　4样品溶液的制备　　4．1测定白果新酸供试品溶液的制备　　精密称取银杏叶药材2g，精密加入石油醚(60～90℃)50ml，称重，回流提取1．5h，放冷，再称重，补足减失重量，过滤。精密吸取滤液25ml，回收溶剂至干，分次加入10ml甲醇，超声至残渣溶解，过滤，移至10ml容量瓶中，过微孔滤膜滤过，即得。　　4．2测定总银杏酸供试品溶液的制备　　精密称取银杏叶药材0．5g，精密加入石油醚(60～90℃)20ml，称重，回流提取1．5h，放冷，再称重，补足减失重量，过滤。精密吸取滤液10ml，回收溶剂至干，分次加

6、入5ml甲醇，超声至残渣溶解，过滤，移至5ml容量瓶中，过微孔滤膜滤过，即得。　　5方法学考察　　5．1精密度试验　　取测定白果新酸供试品溶液(贵州三号)，精密吸取3μl，连续进样6次，测定相应峰面积。取测定总银杏酸供试品溶液(贵州六号)，精密吸取2μl，连续进样6次，测定相应峰面积。白果新酸ＲSD%为0．45%，总银杏酸ＲSD%为0.66%，结果表明精密度良好。结果见表3、表4。　　　　5．2稳定性试验　　精密吸取测定白果新酸供试品溶液(贵州三号)、测定总银杏酸供试品溶液(贵州六号)3、2μl，按照2项下所述的色谱条件，分别于0、2、4、6、8、12h测

7、定，白果新酸ＲSD=0.47%，总银杏酸ＲSD=0.94%，说明各供试品溶液在12h内稳定。结果见表5、表6。　　　　5．3重复性试验　　按4．1项下所述的方法平行处理6次，分别精密吸取测定白果新酸供试品溶液(贵州三号)、测定总银杏酸供试品溶液(贵州六号)3、2μl，同法测定白果新酸、总银杏酸，白果新酸ＲSD=2.35%，总银杏酸ＲSD=2.39%，说明供试品溶液的重复性良好。其结果见表7、表8。　　　　5．4回收率试验　　精密称取已知含量的银杏叶各6份，分别加入各对照品，照供试品溶液制备项下的方法处理，测定