高效液相色谱法测定复方银杏叶片中银杏总黄酮的含量

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1、高效液相色谱法测定复方银杏叶片中银杏总黄酮的含量【摘要】目的建立复方银杏叶片中银杏总黄酮含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，用SymmetryC18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)，以甲醇0.4%磷酸溶液（52∶48）为流动相，流速为1.0ml·min-1，检测波长360nm，柱温35℃。结果该法线性关系良好，平均加样回收率为98.35%,　RSD为1.17%(n=5)。结论该法操作简便，分离效果好，结果准确，专属性强，可作为复方银杏叶片的质量控制方法。【关键词】复方银杏叶片；黄酮；槲皮素；山柰素；异鼠李素；高效液相色谱法　　Abstract：ObjectiveTo

2、establishthedeterminationmethodofflavonoidsinpoundGinkgobilobaLeavesTablets.MethodsTheanalysisedonaSymmetryC18column（4.6mm×250mm,5μm）ethanol0.4%phosphoricacid(52:48)asmobilephaseataflol·min-1,andatacolumntemperatureof35℃.Thedetection.ResultsThelinearityofthismethodplesethodisconvientination

3、offlavonoidsandcanbeusedtoevaluatethequalityofpoundGinkgobilobaLeavesTablets.　　Keypferol；Isorhamin；HPLC　　复方银杏叶片是由银杏叶提取物和广西野葛根提取物等制成的复方制剂，具有活血化淤，降低血脂，清除自由基和抗衰老等功效和作用［1］。银杏叶中所含的槲皮素、山柰素、异鼠李素等黄酮化合物为其主要有效成分之一。银杏叶中黄酮化合物的测定方法很多，如导数光谱法［2］，近红外光谱法［3］，分光光度法［4］，示波极谱法［5］，荧光光度法［6］，库仑滴定法［7］，毛细管电泳法［8］和高效液相色谱

4、法［9］等。而有关银杏叶和野葛根两者配方制剂中银杏总黄酮含量测定方法尚未见报道。本文采用高效液相色谱法测定复方银杏叶片中槲皮素、山柰素、异鼠李素等黄酮化合物的含量，方法快速简便，分离效果良好，专属性强。可用于复方银杏叶片的质量控制。　　1仪器与试药　　1.1仪器美国PerKinElmer公司Series200高效液相色谱仪（包括Series200紫外检测器、Series200二元泵、600Series接口及色谱工作站）。　　1.2试药槲皮素、山奈素、异鼠李素对照品（中国药品生物制品检定所，批号分别为10081200406，110861200405，110860200407）

5、。复方银杏叶片为本课题组在广西科技厅三项基金资助下研制的新产品。甲醇为色谱纯，水为高纯水，磷酸为分析纯。　　2方法与结果　　2.1色谱条件　SymmetryC18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm，美国l·min-1，检测波长360nm，柱温35℃，进样量20μl。　　2.2溶液制备　　2.2.1对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素、山柰素、异鼠李素对照品适量（15.6，17.0，10.0mg）置100ml量瓶中，加甲醇微热使溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。　　2.2.2供试品溶液的制备　取本品10片，除去包衣，研细，精密称取适量（约含银杏总黄酮醇苷19.2m

6、g），置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10ml，置100ml锥形瓶中，加甲醇10ml、25%盐酸溶液5ml，摇匀，置水浴中加热回流30min，迅速冷却至室温，转移至50ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。　　2.2.3阴性对照溶液的制备取处方中除银杏叶提取物以外的其余药材和辅料，按规定工艺制备成片剂后，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。　　2.3标准曲线的制作精密量取上述对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml

7、，分别置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，各进样20μl，按上述色谱条件测定，以对照品浓度C（μg·ml-1）为横坐标，峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线，结果如下：　　槲皮素：A=80074C-52255，r=0.9994，线性范围为15.6～78.0μg·ml-1　　山柰素：A=63168C+35558，r=0.9982，线性范围为17.0～85.0μg·ml-1　　异鼠李素：A=60465C+20840，r=0.9996，线性范围为10.0～50.0μg·ml-1　　2