高效液相色谱法测定复方银杏注射液中银杏总黄酮醇苷含量论文

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1、高效液相色谱法测定复方银杏注射液中银杏总黄酮醇苷含量论文于莲，钟尉方，刘娟，胡盛全【摘要】目的建立复方银杏注射液中银杏总黄酮醇苷的含量测定方法。方法高效液相色谱法，Zorbax-Extend－C18柱(5μm,4.6mm×150mm)；甲醇0.4%磷酸溶液（45∶55）为流动相，流速为1.0ml·min-1，柱温30℃，检测波长360nm。结果槲皮素浓度在2.07～69.00μg·ml-1.freell-1，异鼠李素浓度在0.73～24.20μg·ml-1范围内呈良好线性关系。结论该方法分析时间短、专属性

2、好、稳定，可以作为复方银杏注射液质量控制方法。【关键词】复方银杏注射液；总黄酮；高效液相色谱法Abstract：ObjectiveToestablishamethodfordeterminingtheflavonoidsinpoundGinkgobilobaInjectionbyHPLC.MethodsHPLC,Zorbax-Extend－C18column(5μm,4.6mm×150mm)obilephaseconsistedofmethanol0.4%phosphoricacid(45∶55)l·mi

3、n-1.Thedetection.Thecolumntemperaturepferolandisorhaminl-1,1.91～63.60μg·ml-1and0.73～24.20μg·ml-1.ConclusionThemethodisrapid,exclusiveandsteady,andcanbeusedforthequalitycontrolfortheinjection.Key,4.6mm×150mm)，流动相为甲醇0.4%磷酸溶液（45∶55），检测波长为360nm，流速1.0ml·min-1，

4、柱温30℃，进样量10μl。经确认，出峰顺序为：槲皮素、山柰素、异鼠李素。理论板数按槲皮素峰计算不低于2500，异鼠李素分离度大于1.5。2.2对照品溶液及标准曲线的制备精密称取五氧化二磷干燥的槲皮素、山柰素、异鼠李素，甲醇溶解并定容作为贮备液，浓度为0.345，0.318，0.121mg·ml-1，分别精密吸取3种对照品贮备液各0.06，0.1，0.3，0.7，1.0，2.0ml，于10ml量瓶中，甲醇定容，0.45μm微孔滤膜过滤，作为对照品混合液，在上述色谱条件测定，记录峰面积积分值，分别以对照品的浓

5、度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行回归计算，结果表明：槲皮素浓度在2.07～69.00μg·ml-1范围内呈良好线性关系，回归方程：A=57.375C-14.757，相关系数r=0.9997；山柰素浓度在1.91～63.60μg·ml-1范围内呈良好线性关系，回归方程：A=50.194C+15.311，相关系数r=0.9996；异鼠李素浓度在0.73～24.20μg·ml-1范围内呈良好线性关系，回归方程：A=54.8570C+1.2309，相关系数r=0.9994。2.3供试品溶液的制备精密吸取复方银

6、杏注射液5ml于圆底烧瓶中，加甲醇10mol/L盐酸溶液（4∶1）混合液25ml，恒温回流1.5h，冷却，转移至50ml量瓶中，并加甲醇至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。2.4专属性实验取不含银杏叶提取物的阴性对照注射液，按供试品溶液的制备方法，制备阴性对照溶液，分别取供试品溶液、对照品溶液与阴性对照溶液，相同色谱条件进样测定，测定结果见图1。检测结果证实：样品中槲皮素、山柰素、异鼠李素与其它组分分离较好,且阴性对照在相应的保留时间无干扰。2.5精密度实验取槲皮素、山柰素、异鼠李素浓

7、度分别为10.35，9.54，3.63μg·ml-1的对照品混合液，在上述色谱条件下连续进样6次。槲皮素、山柰素、异鼠李素的峰面积的RSD分别为0.98％，0.90％，1.00％。2.6重复性实验按供试品的制备方法，取同一批号样品注射液6支制备6份复方银杏注射液的供试品溶液，上述色谱条件下测定，槲皮素、山柰素、异鼠李素的峰面积的RSD分别为2.24％,2.99％,2.87％。2.7稳定性考察取新制备的复方银杏注射液供试品溶液，按上述色谱条件分别于0，1.5，4，6，24h测定，槲皮素、山柰素、异鼠李素的峰面

8、积RSD分别为1.67％,1.18％,.freell-1，山柰素浓度9.54μg·ml-1，异鼠李素浓度1.21μg·ml-1），设置程序进样，10μl样品加10μl对照品，二倍体积混匀进样，相同色谱条件测定，计算银杏总黄酮醇苷平均收率为101.23％，RSD为1.43％。2.9样品含量测定按供试品的制备方法，取3批次样品于相同色谱条件进样测定并计算。结果见表1。表1复方银杏注射液中银杏黄酮醇苷含量测定结果（略）