高效液相色谱法测定复方虎杖片中大黄素含量

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1、高效液相色谱法测定复方虎杖片中大黄素含量【摘要】目的建立用高效液相色谱法测定复方虎杖片大黄素含量的方法。方法用phenomenexprodigyODS3（250mm×4．6mm，5μm）色谱柱，流动相：甲醇-0．1%磷酸溶液（85∶15），流速：1．0ml/min，检测波长：254nm，进样量为5μl。结果对照品线性范围为12．02～72．14μg/ml，平均回收率为100．69%，RSD=1．42%（n=6）。结论该方法简便可行，重复性好，能有效控制复方虎杖片的质量。�【关键词】复方虎杖片；大黄素；高效液相色谱法5复方虎杖片原标准收载于《卫生部药品标准》中药成方制

2、剂第三册，只有鉴别、检查项目，专属性差；没有建立含量测定方法，属国家药品标准提高行动计划品种。该品种由虎杖提取物、功劳木提取物、枇杷叶提取物组成，具有清热、祛痰、止咳、平喘，用于慢性支气管炎。因虎杖提取物在成药之中所占比重较大，主要活性成分有大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、芪三酚、芪三酚苷等。由于产地不同，采挖季节不同，主要成分的含量也有很大的差别，同时芪三酚、芪三酚苷未有符合含量测定要求的对照品，因此，为控制其质量，本实验采用高效液相色谱法测定其大黄素的含量，以其作为指标性成分，从而达到控制产品质量的目的。�1仪器、试剂与样品�仪器：TU-1901紫外可见分光光度计，

3、sartoriusCP225D电子分析天平，岛津LC-2010A全自动高效液相色谱仪，Lcsolution工作站，KQ-400KDB数控超声波清洗器。�对照品：大黄素对照品（批号：110756-200110中国药品生物制品检定所，供含量测定用，纯度为100．00%，符合定量测定要求）。�试剂与样品：甲醇为色谱纯，水为高纯水，其他制剂均为分析纯。复方虎杖片及缺虎杖的阴性对照样品（广西河丰药业有限公司提供）。�2方法与结果�2．1色谱条件色谱柱phenomenexprodigyODS3（250mm×4．6mm，5μm），流动相：甲醇-0．1%磷酸溶液（85∶15）[1,

4、2]，流速：1．0ml/min，检测波长：254nm，柱温：30℃。理论塔板数（n）按大黄素峰计算，应不低于9000，进样量为5μl。�2．2对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷减压干燥24h大黄素对照品适量，加甲醇制成每1ml含0．5mg的备用溶液，作为对照品贮备液。另精密量取贮备液适量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，作为对照品溶液，即得。� 52．3供试品溶液的制备取本品，除去包衣，研细，混匀，取0．1g，精密称定，加0．5mol/L硫酸溶液20ml，加氯仿30ml，80℃水浴回流2．5h，分取氯仿层，酸液用氯仿提取3次，每次10ml，合并氯仿提取液，蒸干，

5、残渣加甲醇适量使溶解，置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取2ml，置10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。�2．4阴性样品溶液的制备取阴性样品，按2．3项方法制备阴性样品溶液。�在上述色谱条件下,分别进样对照品、供试品、阴性样品各5μl，大黄素保留时间约为9min，阴性样品对测定无干扰。见图1~3。�2．5线性关系考察精密称取大黄素对照品10．02mg，置100ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1．2、2．4、3．6、4．8、6．0、7．2ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取上述溶液各5μl，分别

6、注入液相色谱仪，测定，记录峰面积，以峰面积（Y）对浓度（X）作图，得标准曲线，计算回归方程：Y=1．8248×104X-1．8952×102，r=0．9999，结果表明：大黄素在12．02～72．14μg/ml线性范围内，浓度与大黄素峰面积呈良好的线性关系。见图4。�2．6精密度试验5取同一供试品溶液，重复进样6次，记录峰面积，结果RSD为0．14%。�2．7重复性试验取同一批样品6份，按上述方法测定大黄素的含量，结果RSD为1．26%。�2．8稳定性考察取“2．7”项下供试品溶液，在0，4，8，12，16，20，24h分别进样5μl，记录峰面积，结果峰面积的RSD

7、为0．19%，表明供试品溶液在24h内均稳定。�2．9加样回收率试验精密称取同一批次（061201批）样品，（大黄素含量为8．6578mg/片，平均每片重为0．2624g）约0．05g。共取6份样，分别精密加入大黄素对照品储备液1．5ml，按上述方法测定，计算加样回收率。结果平均回收率为100．69%，RSD=1．42%（n=6），符合定量分析的要求，详见表1。�3样品测定�按上述含量测定方法，测定10批样品中大黄素的含量，结果见表2。�4讨论�4．15本品主要成份游离蒽醌衍生物，不溶于水，溶于乙醇、乙醚、氯仿、苯等。当用氯仿等有机溶剂从水溶液中萃取游离蒽醌衍生