反相高效液相色谱法测定复方小檗片中盐酸小檗碱的含量

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1、反相高效液相色谱法测定复方小檗片中盐酸小檗碱的含量作者：邓放，刘圆，刘超，孟庆艳，高泽文【关键词】盐酸小檗碱；,,复方小檗片；,,含量测定；,,反相高效液相色谱法摘要：目的采用反相高效液相色谱(RPHPLC)法测定复方小檗片中盐酸小檗碱的含量。方法用Kromasil色谱柱（5μm，250mm×4.6mm），流动相∶乙腈水磷酸二氢钾十二烷基磺酸钠（500ml∶500ml∶3.0g∶1.5g），流速：1ml・min-1，柱温：40℃，检测波长为345nm。结果在0.0212～0.2332μg之间，峰面积与进样量的线性关系为Y=35130

2、92.99X-15938.76（r=0.9999），平均回收率为97.22％。测得3批片剂中盐酸小檗碱的含量分别为0.772，0.748，0.749mg/片。结论所建方法简便、准确、重复性好，可用于复方小檗片中盐酸小檗碱的含量测定。关键词：盐酸小檗碱；复方小檗片；含量测定；反相高效液相色谱法DeterminationofBerberineContainedinPrescriptionofBerberinePillbyRPHPLCAbstract：ObjectiveToestablishanRPHPLCmethodtodetermineberber

3、inefromprescriptionofberberine.MethodsThecolumnasil(5μm，250mm×4.6mm),themobilephaseconsistedofmethylcyanide:l∶500ml∶3.0mg∶1.5mg),theflol/minandtheUVdetector.ResultsThemethoddisplayedgoodlinearityg/pill.ConclusionThismethodissimple,accurate,replicateandsuitableforthedeterminat

4、ionofberberineinprescriptionofberberine.Keyination;RPHPLC复方小檗片，由龙胆花、小檗皮、甘草等多味药材组成,含有龙胆碱、龙胆苦苷、三萜皂苷类成分、生物碱及莨菪类成分等［1］。具清热化痰，止咳平喘的功效，小檗碱是主要成分之一［2~4］。本实验利用HPLC法测定复方小檗片中盐酸小檗碱的含量。1仪器与试药仪器：g，置100ml量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀,即得（每毫升含盐酸小檗碱0.0212mg）。2.1.2供试品溶液［5］取复方小檗片10片，除去薄膜衣，研细，取0.72g，精密称定

5、，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇40ml，称定重量，超声处理20min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置30min，滤过，取续滤液作为供试品溶液。2.2色谱条件色谱柱：C18250mm×4.6mm，5μm；流动相：乙腈水磷酸二氢钾十二烷基磺酸钠（500ml∶500ml∶3.0g∶1.5g）；流速：1.0ml/min；柱温：40℃；检测波长：345nm。2.3线性范围的考察精密量取上述盐酸小檗碱对照品溶液1，3，5，7，9，11μl注入液相色谱仪，记录色谱图(见图1)，测定其峰面积，结果见表1，并以峰面积（Y）为纵坐标，进样

6、量（X）为横坐标，进行回归，得回归方程。表1盐酸小檗碱线性关系考察结果（略）在所拟定的色谱条件下，盐酸小檗碱在0.0212～0.2332μg之间，进样量与峰面积线性关系良好。2.4空白实验取不含小檗皮的阴性片粉适量，按供试品溶液制备方法制备空白对照溶液，进样10μl，记录色谱图(见图1)，可见其它成分对盐酸小檗碱的测定无干扰。图1盐酸小檗碱对照品（a）、样品（b）和空白溶液（c）的HPLC图谱（略）2.5精密度实验精密吸取盐酸小檗碱(0.0212mg/ml)对照品溶液10μl，连续进样5次，测得峰面积值结果见表2。表2精密度实验结果（略）盐酸小檗

7、碱的RSD为0.202％，以上结果表明，精密度良好。2.6稳定性实验取样品供试液于0，2，4，6h及8h，进样10μl，峰面积结果见表3。表3稳定性实验结果（略）实验结果表明，样品供试液在8h内稳定性良好。2.7重复性实验取同一批样品，按上述色谱条件测定，记录色谱图(见图1)，并计算含量。结果见表4。表4样品重复性实验测定（略）RSD为0.482％，上述实验表明，该方法重现性较好。2.8加样回收率实验取已知含量的样品约0.36g，精密称定，分别加入对照品溶液（0.0212mg/ml）24，30，36ml，按上述样品制备方法和色谱条件，制备加样回收

8、供试品溶液并注入高效液相色谱仪，记录色谱图，并按下列公式计算回收率。结果见表5。回收率=测得量（mg）-样品中盐酸小檗碱量（mg）加入对