薄层扫描法测定消积片中盐酸小檗碱含量

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1、薄层扫描法测定消积片中盐酸小檗碱的含量昆山玉碎凤凰叫，芙蓉泣露香兰笑。假作真时真亦假，无为有处有还无。勿以恶小而为之，勿以善小而不为。无可奈何花落去，似曾相识燕归来。桃李不言，下自成蹊。薄层扫描法测定消积片中盐酸小檗碱的含量更新日期：2011-08-06点击：魏波　代雪平　刘平香中图分类号：R927.2　　　文献标识码：B文章编号：1001－0408（2000）01－0040－01▲　　消积片由人参、白术、甘草、黄连、陈皮等12味常用中药经提取加工而成。为了压片及矫正口感，处方中加入了大量的乳糖和蔗糖，以及其它添加剂，这些成分的存在，影响了盐酸小檗碱的含量测定。以往曾用氧化铝柱层析法[1]除

2、杂，但供试品溶液中仍含有较多的糖，使薄层色谱分离度差，影响扫描测定。本文采用大孔树脂吸附法较好地解决了这一问题。1　实验材料1.1　仪器　　瑞士CAMAGⅡ型薄层色谱扫描仪（3.15版本数据处理软件）。1.2　药品与试剂　　消积片，由河南新乡人民制药厂提供；盐酸小檗碱对照品，由中国药品生物制品检定所提供（批号713－9204），纯度符合含量测定要求。2　测定方法2.1　扫描条件　　采用以3％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板，以苯－醋酸乙酯－异丙醇－甲醇－浓氨试液（12∶6∶3∶3∶1）为展开剂，展开前与等体积浓氨试液共同预平衡15分钟；扫描波长λs∶350nm。2.2　溶液配制2.2.1

3、　对照品溶液：精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加乙醇制成每1ml约含0.3mg的溶液，备用。2.2.2　样品溶液：取消积片20片，精密称重，研细，精密称取约5片量细粉置索氏提取器中，加甲醇回流提取至提取液无色。回收提取液，残渣加水溶解并完全转移入已处理好的D101大孔树脂柱（内径1cm，树脂层高15cm，50ml水预洗）上，以1滴/秒的速度洗脱（下同），再用50ml水洗脱，最后用50ml乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，置水浴上蒸至少量，并完全移入5ml量瓶中，用乙醇定容，备用。2.3　测定方法　　吸取对照品溶液2μl、5μl及样品溶液5μl，按上述扫描条件进行扫描，测定样品及对照品吸收度积分值，计算

4、，即得。3　结果3.1　薄层色谱分离结果　　薄层色谱扫描结果见图1。图1中Ⅱ为样品溶液色谱图，可以看出盐酸小檗碱斑点较集中，且前后均无干扰峰，近于基线分离，适用于扫描测定含量。Ⅰ阴性对照（缺黄连）　Ⅱ消积片　Ⅲ盐酸小檗碱图1　薄层色谱扫描图3.2　标准曲线　　吸取每1ml含盐酸小檗碱0.3064mg的对照品溶液1μl、2μl、3μl、4μl、5μl，点于同一硅胶G薄层板上，按上述条件展开取出，晾干，扫描，测定吸收峰面积，进行回归分析，得回归方程：Y（积分值）=451.58X（点样量μl）＋217.96。测定结果表明，在0.3064μg～1.532μg的考察范围内点样量和吸收积分值之间线性关系

5、较好（γ=0.9996，n=5）。3.3　回收率　　精密称取已知盐酸小檗碱含量的消积片供试品约5片量，置索氏提取器中，加入对照品溶液2.00ml，按供试品溶液制备方法操作，最后定容于10ml量瓶中，作为供试品溶液，按测定方法进行测定，计算加样回收率。结果，加样回收率平均为98.6％（n=5，RSD=0.9％），说明本方法回收率较高。3.4　精密度　　取同一批消积片样品，按测定方法先后共测定5次，各次测定结果间的RSD为1.0％。3.5　阴性对照试验　　除黄连外，方中其余各味按消积片制法项下规定制成阴性对照样品，取阴性对照样品按样品溶液制备方法制成阴性对照溶液，取上述溶液5μl及盐酸小檗碱对照

6、品溶液2μl，点于同一块硅胶G薄层板上，按上述色谱条件展开。结果，阴性对照色谱中在与对照品色谱同一位置上不显相同的斑点，对本测定无干扰（扫描色谱见图1）。3.6　实际测定3批样品　　测定3批消积片中盐酸小檗碱含量，并同时测定原料药材黄连中盐酸小檗碱含量，求出消积片中盐酸小檗碱理论含量，二者较为符合（见表1）。表1　3批消积片盐酸小檗碱含量测定结果批号950201950202950203实测含量1.1mg/片1.4mg/片1.6mg/片理论含量1.2mg/片1.5mg/片16.mg/片4　讨论4.1　pH值对大孔树脂吸附盐酸小檗碱的影响　　大孔树脂是有机高分子聚合物，结构骨架与离子交换树脂相似

7、，但不含离子交换基因。因此，大孔树脂对生物碱的吸附只是表面吸附。这种吸附作用受pH影响较大。本实验中曾采用盐酸－甲酸回流提取小檗碱，提取物水溶液酸性，当用大孔树脂进行除杂时，小檗碱亦被洗脱下来；后改用甲醇提取，提取物水溶液呈中性，大孔树脂吸附小檗碱较牢固，方法回收率好。4.2　本法的特点及应用　　文献[2]报道，用大孔树脂提取三颗针中的生物碱，提取率达97％，这与本文结果一致。本实验表明，大孔树脂是定量分析中