hplc法测定双黄消炎片中盐酸小檗碱的含量论文

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1、HPLC法测定双黄消炎片中盐酸小檗碱的含量论文【摘要】目的用HPLC法测定双黄消炎片中盐酸小檗碱的含量。方法HPLC用外标一点法，DiamonsilODS1C18柱，乙腈-0.033mol/L磷酸二氢钾溶液（35:65）为流动相，流速为1.0ml/min，λ=265nm。结果盐酸小檗碱在13.525～108.20μg/ml范围内呈良好线性,.freelethodfordeteminingthecontentofBerberinehydrochlorideinshuanghuangxiaoyanPianbyH

2、PLC.MethodsUsingDiamonsilODS1C18Column,acetonitrile-0.033mol/LPotassiumPhosphateMonobasicacid（35：65）asthemobilephase,detectionandflol/min.ResultsThecalibrationcurvelfortheBerberinehydrochlorideandlinearequationethodpleandaccurateandproper,ethodofBerberineh

3、ydrochlorideinshuanghuangxiaoyanPianandthereduplicationoftheresultol/L磷酸二氢钾溶液（35:65）为流动相；检测波长为265nm；流速为1ml/min；柱温为室温。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000。2.2溶液的制备对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本品20片，研细，取0.5g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超声处理30min（功率：13

4、5l置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。2.3阴性样品的测试取缺三颗针的样品，按供试品制备法制备阴性样品后测定，在盐酸小檗碱相应位置无峰出现，说明阴性样品的其他成分无干扰。见图1～3。图1盐酸小檗碱对照品色谱图图2双黄消炎片色谱图图3阴性样品色谱图2.4线性关系的考察取盐酸小檗碱对照品适量,加甲醇配制不同浓度的对照品溶液，分别为13.525μg/ml、27.05μg/ml、54.10μg/ml、81.15μg/ml、108.20μg/ml，照上述色谱条件各进样10μl测定

5、峰面积（结果见表1），以峰面积积分值为纵坐标，以不同浓度为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程Y=63204.63X+4501.15r=0.9993（n=5）,表明盐酸小檗碱在13.525～108.20μg/ml之间呈良好的线性关系。表1线性关系的考察2.5精密度试验精密吸取对照品溶液（54.1μg/ml）进样量10μl，连续进样6次，记录峰面积（结果见表2），测定结果RSD为1.26%，表明精密度良好。表2精密度试验2.6重现性试验取本品（20070501）20片，称取平均处重，研细，取6份，每份0.5g，精

6、密称定，照供试品溶液制备方法，制成供试品溶液，照上述色谱条件进行试验，进样10μl，测定每份盐酸小檗碱含量（结果见表3），结果RSD为1.54%，重现性良好。表3重现性试验2.7稳定性试验取同一供试品溶液（批号：20070501），分别在0、2、4、6、8h进样10μl，测定盐酸小檗碱峰面积（结果见表4），RSD为3.29%（n=5）。表明制备的供试品溶液在8h内稳定。表4稳定性试验2.8加样回收率试验精密称取已知含量的同一批号供试品（批号：20070501）5份，取样量为0.25g，精密称定,分别加入浓度

7、为2.861mg/ml的对照品溶液1ml，按照供试品溶液制备方法，制备供试品溶液，进样量10μl，测定盐酸小檗碱含量（结果见表5），平均回收率为98.2%，RSD为1.59%（n=6）。表5加样回收率试验2.9样品测定按照供试品溶液制备方法对3批产品进行测定，测定结果见表6。表6含量测定结果3讨论3.1样品每片含三颗针以盐酸小檗碱（C20H18ClNO4）计，均不少于3.0mg，由于各地三颗针药材的差别较大，因此暂规定：本品每片含三颗针以盐酸小檗碱（C20H18ClNO4）计，不得少于3.0mg。3.2参考

8、《中国药典》2005年版一部复方黄连素片项下含量测定方法所用的流动相，分别采用乙腈：0.033mol/L磷酸二氢钾（40：60、25：75、35：65）为流动相，进行试验，结果以乙腈－0.033mol/L磷酸二氢钾（35：65）为流动相所得色谱图分离效果及出峰时间较为合适。因此选择流动相为乙腈-0.033mol/L磷酸二氢钾（35：65）。【