反相高效液相色谱法测定竺黄复方片中甘草酸的含量.doc

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1、反相高效液相色谱法测定竺黄复方片中甘草酸的含量【摘要】目的采用反相高效液相色谱（RPHPLC）法测定竺黄复方片中甘草酸的含量。方法采用kromasilC18柱（200mm×4.6mm,5μm），以甲醇-0.2mol·L-1乙酸铵-冰乙酸（65∶35∶1）为流动相，流速1ml·min-1，柱温30℃，检测波长250nm。结果在0.402～2.010μg之间，峰面积与进样量的线性关系为A=673028.2878C-67302.7076（r=0.9998），平均回收率为99.66％。测得3批样品中甘草酸的含量（以甘草酸铵计）分别为1.034，1.103和1.008mg/片。结论所建方法简便

2、、准确、重复性好，可用于竺黄复方片的质量控制。【关键词】竺黄复方片；甘草酸；反相高效液相色谱法　　Abstract：ObjectiveToestablishanHPLCmethodtodetermineglycyrrhizicacidfromprescriptionofZhuhuangTablet.MethodsThecolumnwaskromasilC18(200mm×4.6mm,5μm),themobilephaseconsistedofMethanol～0.2mol·L-1Ammoniumacetate-Glacialacrticacid(65:35:1),withtheflow

3、rateof1ml·min-1andtheUVdetectorwassetat250nm.ResultsThemethodshowedagoodrangeof0.402～2.010μg(r=0.9998).Theaveragerecoverywas99.66%.Theglycyrrhizicacidcontentsofthreebatchsampleswere1.034,1.103，1.008mg,respectively.ConclusionThismethodissimple,accurate,repeatableandsuitableforthedeterminationofgl

4、ycyrrhizicacidinprescriptionofZhuhuangTablet.　　Keywords：PrescriptionofZhuhuangTablet；Glycyrrhizicacid;RP–HPLC竺黄复方片由甘草、力嘎都、牛黄、红花、榜嘎（唐古特乌头）等九味药材组成，具有利肺、消炎、止痛的功效，用于小儿流感引起的肺炎、上呼吸道感染等［1］。该方标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》藏药第一册，标准未收载鉴别项和含量测定项，不利于生产和使用的相关部门控制其药品质量。本文拟建立甘草酸含量测定方法，增加含量测定项，提高其质量标准。　　1材料Waters2695/26

5、90分离系统，2996（2487）检测器，Empower色谱管理系统，岛津UV-2100型紫外分光光度计，AtutoScienceAS5150超声波清洗仪，Sartorius公司BP211D电子天平。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。　　2方法与结果3　　2.1甘草酸的含量测定　　2.1.1色谱条件和系统适用性实验用kromasil色谱柱（200mm×4.6mm,5μm），流动相为甲醇-0.2mol·L-1乙酸铵-冰乙酸（65∶35∶1），流速1ml·min-1，柱温：30℃，检测波长250nm［2］，按甘草酸铵峰计，色谱柱理论塔板数不低于2000，甘草酸铵峰与其它峰达到

6、基线分离，峰形对称，色谱图见图1。　　2.1.2溶液的制备对照品溶液的制备：精密称取甘草酸铵对照品适量，置10ml量瓶中，加甲醇-0.2mol·L-1乙酸铵-冰乙酸（65∶35∶1）溶解并稀释至刻度，摇匀,使成为每毫升中含对照品0.201mg的溶液即得。样品溶液的制备：取竺黄复方片适量，研细，取1.5g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-0.2mol·L-1乙酸铵-冰乙酸（65∶35∶1）溶液45ml，称定重量，超声处理30min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，用0.45μm滤膜滤过即得。阴性样品溶液的制备：取缺甘草的阴性样品

7、，照上述样品溶液制备方法处理即得阴性样品溶液。　　2.2方法学考察　　2.2.1线性范围精密量取上述甘草酸铵对照品溶液2，4，6，8，10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积，并以峰面积A为纵坐标，进样量C（μg）为横坐标，进行回归，得回归方程：A=673028.2878C-67302.7076，甘草酸铵在0.402～2.010μg之间，进样量与峰面积线性关系良好（r=0.9998）。　　2.2.2精密度实验精密吸取对照品溶液10μl，