反相高效液相色谱法测定清咽片中靛蓝的含量论文

《反相高效液相色谱法测定清咽片中靛蓝的含量论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、反相高效液相色谱法测定清咽片中靛蓝的含量论文.freelBondAQC18色谱柱；甲醇水乙酸（64∶36∶0.5）为流动相，流速0.8mlmin-1，紫外检测波长为285nm。结果靛蓝可与其他主要成分分离，靛蓝与峰面积呈良好线性关系.freelethodusingRP-HPLCfordeterminationofthecontentofIndigoinQingyantablet.MethodsThecontentofIndigoNaturalisinedbyreversephaseHPLCat285nmonaAichromBond-AQC18column(4.6mm

2、×250mm,5μm)ethanol-obilephaseandflolmin-1.ResultsThelinearrangeofcalibrationcurveethodissimple,accurateandcanbeusedforthequalitystudyofQingyanTablet.Keyination;HPLC清咽片是由桔梗、硼砂、寒水石、青黛、冰片、薄荷脑、诃子（去核）、甘草、甘草霜等中药组成的复方制剂。具有清凉解热、生津止渴之功效，用于咽喉肿痛、声嘶音哑、口干舌燥、咽下不利的治疗。青黛为方中君药，靛蓝（Indigo）是其中主要成分，具有抗菌消毒、

3、祛腐生肌之疗效，是该药主要有效成分之一，因此选为测定指标。靛蓝含量测定方法有：紫外分光光度法［1］、直接比色法［2~4］、高效液相色谱法［5，6］等。由于本品为复方制剂，成分复杂，文献报道方法欠佳，故本实验采用高效液相法测定靛蓝的含量。1器材岛津LC-10AT高效液相色谱仪；岛津SPD-10A紫外检测器；2010双通道色谱工作站；KQ-250D数控超声波清洗器。靛蓝（indigo商品号：0756-200211）对照品由中国药品生物制品检定所提供，甲醇为色谱纯（美国Fisher公司生产），氯仿为分析纯，水为重蒸水，清咽片由长春银诺克药业提供。2方法与结果2.1对照品溶

4、液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥24h的靛蓝对照品适量，加氯仿制成每毫升含0.0294mg的溶液。2.2供试品溶液的制备取重量差异项下的本品20片，除去糖衣，研细，取2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氯仿25ml，精密称定重量，超声处理1h（每隔10min振摇），取出放至室温，再称定重量，加氯仿补足减失的重量，过滤，滤液用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。2.3色谱条件色谱柱为岛津公司产AichromBond-AQC18柱（4.6mm×250mm,5μm）；以甲醇-水-乙酸（64∶36∶0.5）为流动相，流速0.8mlmin-1，紫外检测波长为2

5、85nm，理论板数按靛蓝峰计算应不低于3000。2.4标准曲线的绘制精密吸取上述对照品溶液1，5，10，15，20μl依照上述色谱条件进行分析，以进样体积（μl）为横坐标，以靛蓝的峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线，计算得到的回归方程为：Y=26644.73X-1288.56，r=0.9999；线性范围为0.0294~0.588μg。2.5精密度实验精密吸取同一供试品溶液20μl，重复进样6次，测定靛蓝的峰面积，计算面积的RSD值为0.58%。2.6重现性实验取批号为20051001的清咽片适量，6份，除去糖衣后，研细，精密称定，按“2.2项”下的方法操作，制备供试品溶

6、液，测定清咽片中靛蓝的含量，计算含量的RSD值为0.58%。2.7稳定性实验分别精密吸取放置1，2，4，6，8，12h的供试品溶液，测定清咽片中靛蓝的峰面积，计算峰面积的RSD值为0.77%，表明供试品溶液至少在12h内稳定。2.8加样回收率实验精密称取靛蓝对照品适量，加入到已知靛蓝含量的清咽片（批号：20051001，靛蓝含量为0.0467%）中，按“2.2项”下方法操作，制备供试品溶液，测定清咽片中靛蓝的含量，结果靛蓝的平均回收率为99.51%,RSD为0.72%,n=5。2.9清咽片中靛蓝的含量测定按“2.2项”下方法操作，制备供试品溶液，测定10批清咽片中靛

7、蓝的含量。结果见表1。表1清咽片中靛蓝的含量测定结果(略)测定结果表明，清咽片中靛蓝含量基本稳定，故在平均含量的基础上，总含量上浮及下浮20%制定本制剂含量限度，限定每片含靛蓝的量不得低于0.11mg。3讨论3.12005年版《中国药典》采用紫外分光光度法测定靛蓝的含量，本实验采用高效液相法测定，操作简单，重现性好。通过全波长扫描得到靛蓝在285nm处有最大吸收，因此选择285nm为检测波长。3.2曾采用甲醇超声1h，甲醇加热回流2h，氯仿超声1h，氯仿加热回流2h制备供试品溶液，结果发现，以甲醇为溶媒制备供试品溶液时，其它成分干扰较大，而且提取不完全；而以氯仿