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1、葛根素对大鼠心肌细胞离子通道的影响作者：张华，马兰香，杨星昌，张磊，段继源，原平利【关键词】大鼠 PuerarininhibitsionicchannelcurrentIk1inratcardiacmyocytes 【Abstract】AIM:ToexploretheeffectofpuerarinontheinhibitionofionicchannelcurrentIk1inratcardiacmyocytesandtherelatedmechanismofpuerarin.METHODS:Ionicchannelcurrents(I
2、k1,Ito)ofisolatedadultratventricularmyocytesptechnique.Isolatedadultratventricularmyocyteslydividedinto5groups:controlgroup,thegroupof1.2mmol/Lpuerarin,thegroupof2.4mmol/Lpuerarin,thegroupof4.8mmol/Lpuerarinandthegroupof9.6mmol/Lpuerarin.RESULTS:PuerarindecreasedIk1instanta
3、neoucurrentandsteadystatecurrentelicitedby500msdurationofpulsesdepolarizedtodifferentmembranepotentialinadosedependentmanner.CONCLUSION:PuerarinblocksIk1ofionicchannelinratcardiacmyocytesinadosedependentmanner. 【Keychannel;tping;ionicchannel;patchclamprecording;puerarin 【
4、摘要】目的：探讨葛根素对大鼠心肌细胞离子通道的影响及其抗心律失常的电生理学机制.方法：采用Langendoff胶原酶灌注加浸泡法分离大鼠心室肌细胞，据不同细胞外灌流液将实验分5组：对照组；葛根素1.2,2.4,4.8和9.6mmol/L组.分别用膜片钳全细胞记录各组内向整流钾通道（Ik1）、瞬时外向钾通道（Ito）的电流.结果：在500ms去极化的实验条件下，葛根素使不同去极化水平时的Ik1瞬间电流及稳态电流均明显下降.随着药物剂量的增加，这种抑制作用也增强.结论：葛根素对大鼠心肌细胞离子通道的作用主要是抑制Ik1，且抑制呈浓度依赖性. 【
5、关键词】Ik1通道；电压钳；离子通道；膜片钳；葛根素 0引言 心肌细胞的跨膜离子流和单离子通道电流是洞察动作电位产生机制和冲动传导的关键，也是了解心脏功能异常以及心律失常发生机制的前提，所有作用于心脏的药物，尤其是抗心律失常药作用的中心环节也是单离子通道和跨膜离子流.我们已经证实葛根素对爪蟾卵母细胞表达的内向整流钾通道(Ik1)电流有抑制作用，那么，它对心肌细胞的Ik1是否也有同样的作用?对心肌的其他离子通道有无影响?有关这方面的研究报道甚少.我们将观察葛根素对大鼠心肌离子通道的影响，为其抗心律失常作用的开发提供理论依据. 1材料和方法
6、 1.1材料 成年雌性大鼠，25只，体质量（230±20）g,由第四军医大学实验动物中心提供.葛根素,牛血清白蛋白（购自Sigma）,胶原酶1（购自Sigma）,Hepes（购自Sigma）,taurine（购自Sigma）,倒置显微镜(OlympusIMT2,Japan),数据采集卡(Axon,USA),膜片钳放大器(NikonKohden,Japan). 1.2方法 1.2.1单心室肌细胞的分离及实验分组猛击大鼠头部，使其晕厥，迅速打开胸腔，剪开心包，沿主动脉根部向上约0.5cm处剪下心脏和部分大血管，置于4℃的Tyrode液中.
7、冲洗冠脉迅速用分离装置行主动脉逆行灌流，无钙Tyrode液灌流3min左右,含胶原酶和牛血清白蛋白的无钙Tyrode液灌流约30min，直至心脏变白、变软,KB液冲洗心脏5min,细剪刀剪下心室肌，在KB液中剪碎，37℃温育10min后，用孔径200μm的尼龙网过滤出单心室肌细胞，室温保存待测.葛根素不同的浓度溶解于细胞外液中，大鼠随机分为5组（n=5）：对照组、葛根素1.2,2.4,4.8和9.6mmol/L组. 1.2.2电生理学测定方法取一滴KB液中保存的心室肌细胞悬液，置于倒置显微镜实验平台上的玻璃灌流槽内，静置10min使细胞贴附
8、于灌流槽底部的玻片上.加Tyrode液对细胞复钙.选择边缘整齐、横纹清晰、表面光洁、静止的棒状心室肌细胞进行实验.灌流槽内的细胞贴壁后，以正常的细胞外液灌流细胞.操
