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1、葛根素对大鼠心肌细胞离子通道的影响论文张华，马兰香，杨星昌，张磊，段继源，原平利【关键词】大鼠PuerarininhibitsionicchannelcurrentIk1inratcardiacmyocytes【Abstract】AIM:ToexploretheeffectofpuerarinontheinhibitionofionicchannelcurrentIk1inratcardiacmyocytesandtherelatedmechanismofpuerarin.METHODS:Ionicchannelcurrents(Ik1,Ito)o
2、fisolatedadultratventricularmyocytesptechnique.Isolatedadultratventricularmyocyteslydividedinto5groups:controlgroup,thegroupof1.2mmol/Lpuerarin,thegroupof2.4mmol/Lpuerarin,thegroupof4.8mmol/Lpuerarinandthegroupof9.6mmol/Lpuerarin.RESULTS:PuerarindecreasedIk1instantaneoucurrent
3、andsteadystatecurrentelicitedby500msdurationofpulsesdepolarizedtodifferentmembranepotentialinadosedependentmanner.CONCLUSION:PuerarinblocksIk1ofionicchannelinratcardiacmyocytesinadosedependentmanner.【Keychannel;tping;ionicchannel;patchclamprecording;puerarin【摘要】目的：探讨葛根素对大鼠心肌细胞
4、离子通道的影响及其抗心律失常的电生理学机制.方法：采用Langendoff胶原酶灌注加浸泡法分离大鼠心室肌细胞，据不同细胞外灌流液将实验分5组：对照组；葛根素1.2,2.4,4.8和9.6mmol/L组.分别用膜片钳全细胞记录各组内向整流钾通道（Ik1）、瞬时外向钾通道（Ito）的电流.结果：在500ms去极化的实验条件下，葛根素使不同去极化水平时的Ik1瞬间电流及稳态电流均明显下降.随着药物剂量的增加.freela）,胶原酶1（购自Sigma）,Hepes（购自Sigma）,taurine（购自Sigma）,倒置显微镜(OlympusIMT2,.
5、freel处剪下心脏和部分大血管，置于4℃的Tyrode液中.冲洗冠脉迅速用分离装置行主动脉逆行灌流，无钙Tyrode液灌流3min左右,含胶原酶和牛血清白蛋白的无钙Tyrode液灌流约30min，直至心脏变白、变软,KB液冲洗心脏5min,细剪刀剪下心室肌，在KB液中剪碎，37℃温育10min后，用孔径200μm的尼龙网过滤出单心室肌细胞，室温保存待测.葛根素不同的浓度溶解于细胞外液中，大鼠随机分为5组（n=5）：对照组、葛根素1.2,2.4,4.8和9.6mmol/L组.1.2.2电生理学测定方法取一滴KB液中保存的心室肌细胞悬液，置于倒置显微
6、镜实验平台上的玻璃灌流槽内，静置10min使细胞贴附于灌流槽底部的玻片上.加Tyrode液对细胞复钙.选择边缘整齐、横纹清晰、表面光洁、静止的棒状心室肌细胞进行实验.灌流槽内的细胞贴壁后，以正常的细胞外液灌流细胞.操作微操纵器使玻璃微电极入水、封接测试，调节电极尖端电位为零，10mV的除极化刺激，测电阻.镜下调整电极位置，接触到细胞膜后可见阻值变大，略施负压持续吸引，形成巨阻抗封接，随后以脉冲式负压吸破细胞膜，形成全细胞记录状态.此时可见有较大的膜电容电流出现，补偿膜电容，稳定5min后记录电流.1.2.3Ik1的记录常规全细胞电压钳情况下，钳制心
7、室肌细胞膜电位于-80mV，测试电压从-140~+20mV，以10mV步幅使之去极化至不同膜电位水平，持续时间500ms，刺激频率0.2Hz.观察各组对离子通道电流的影响.统计学处理：实验所得的电生理资料采用Microcal公司的Origin6.0软件包进行统计分析，并绘制统计图.以正常细胞外液记录的电流峰值为100%，加药后的电流为正常电流的百分数.数据均以x±s表示，多组比较采用ones去极化的实验条件下，葛根素使不同去极化水平时的Ik1瞬间电流及稳态电流均明显下降，随着药物剂量的增加，这种抑制作用也增强.将心肌细胞由-140mV去极化至+20
8、mV，持续500ms，测定不同浓度的葛根素对Ik1稳态电流的抑制作用.在2~3min内，葛根素即可浓度依赖性地抑制Ik1,
