反相高效液相色谱法测定颈通颗粒中葛根素的含量

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1、反相高效液相色谱法测定颈通颗粒中葛根素的含量【摘要】目的采用反相高效液相色谱法（RPHPLC）测定颈通颗粒中葛根素的含量。方法采用迪马RP18(4.6mm×150mm，5μm),流动相：甲醇-0.025mol·L-1磷酸溶液（20∶80），检测波长λ=250nm，柱温30℃，流速1ml/min。结果葛根素在0.005～0.05mg/ml浓度范围内线性关系良好，(r=0.9999)。平均回收率100.23%，RSD=1.35%（n=5）。结论该方法操作简便，结果可靠，重现性好，可作为该药质量控制的方法。【关键词】葛根素；颈通颗粒；反相高效液相色谱法　　DeterminationofPuer

2、arininJingtongGranulebyRP-HPLC　　Abstract：ObjectiveToestablishanRP-HPLCmethodfordeterminationofpuerarininJingtongGranules.MethodsDIKMARP-18column(4.6mm×150mm,5μm)ethanol-0.025mol/Lphosphoricacid(20∶80)asamobilephase.Thedetection.Thetemperatureofcolumnl/min.Theinjectionvolumel(r=0.9999).Theaveragerec

3、overyethodissimpleandcredible.ItcanbeusedforthequalitycontrolofJingtongGranules.　　KeypL7150，HITACHIDetectorL7420UVVIS。　　1.2对照品葛根素（110752200410）对照品由中国药品生物制品检定所提供。　　1.3药品颈通颗粒。　　1.4试剂甲醇为分析纯，水为亚沸蒸馏水（自制）。　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱：迪马RP18(4.6mm×150mm，5μm)，流动相：甲醇-0.025mol·l-1磷酸溶液（20∶80），检测波长λ=250nm，柱温30℃，流

4、速1ml/min,进样量20μl。　　2.2对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品5mg，置50ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀备用。　　2.3供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物，研磨，精密称定（约1g），置50ml锥形瓶中，加入甲醇10ml左右，超声波处理10min，离心回收上层溶液，沉淀再加甲醇10ml左右，重复上面操作，连续3次后，将收集到的溶液放冷，用流动相定溶于50ml容量瓶中，备用。　　2.4阴性溶液的制备及实验取除葛根素之外的其它药材，按照制备工艺制成空白样品，采用上文中样品的处理方法进行空白样品处理，制成空白溶液；分别取供试品，对照品及空白溶液进样进行峰检测，结果

5、复方除葛根素外的其它药味不干扰葛根素的测定。结果见图1。　　2.5线性关系的考察精密称定葛根素适量，用甲醇配制成0.1mg/ml的溶液，作为对照品溶液；依次取对照品溶液0.5，1，2，3，5ml置于10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀；分别取上述溶液20μl注入液相色谱仪中，记录色谱图，以峰面积（A）对对照品的浓度（C）进行线性回归，其回归方程为Y=3.85×107X－1.49×104（r=0.9999），结果表明葛根素进样量在0.005～0.05mg/ml浓度范围内线性关系良好。　　2.6精密度实验精密吸取同一葛根素对照品20μl，连续进样5次，峰面积RSD为2.2%（n=5）。测定

6、结果表明，本试验精密度实验符合有关规定。　　2.7重现性实验精密称取同一批复方药材5份，按复方样品供试液的制备方法平行操作，得5份提取液，各取20μl进样，峰面积RSD为2.9%（n=5）。测定结果表明，本实验重现性实验符合有关规定。　　2.8稳定性实验取同一份供试品溶液，分别在1，2，3，4，5h测定，结果吸收峰面积变化不大，RSD为0.4%（n=5）。结果表明供试品制备后5h内稳定，色谱峰面积无明显变化，在此时间内，待测组分化学性质稳定。　　2.9回收率实验精密称取阴性溶液5份，分别加入一定量的葛根素对照品，依法制备供试品溶液并测定，计算葛根素的回收率。结果见表1。表1回收率实验结果（略

7、）测定结果：本方法回收率在98.9%～102.2%之间，RSD为1.35%，符合相关规定。　　2.10样品测定取3个批次本品依法配置供式样品并测定葛根素含量，结果见表2。表2样品含量测定结果（略）　　3讨论本实验根据葛根素性质，采用甲醇为溶剂，每次加10ml甲醇,超声波连续提取3次，每次10min，最后1次提取时，甲醇几乎无色，该提取方法明显好于一次加入30ml超声30min的方法，故确立该提取方法。在供试品