反相高效液相色谱法测定益气降糖胶囊中葛根素的含量论文

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1、反相高效液相色谱法测定益气降糖胶囊中葛根素的含量论文【摘要】目的建立益气降糖胶囊中葛根素的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为C18色谱柱（5μm，4.6mm×200mm）；甲醇0.5％醋酸（体积比19∶81）为流动相；流速1.000mL/min，检测波长250nm，柱温35℃。结果葛根素的进样量在0.0535～0.535μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，r＝0.9998；平均回收率为96.32％，RSD为0.63％。结论本方法简单、可靠、专属性强，可以作为控制益气降糖胶囊质量的方法。【关键词】益气降糖胶囊；葛根素；高效液相色谱法Abstract:ObjectiveTo

2、establishanHPLCmethodforanalyzingthecontentofpuerarininYiqijiangtangcapsule.MethodsSamplesn（5m.freelm200mm）byusingmethanol0.5％HAc（19∶81）asmobilephase.Theflol/minandthedetecting.ResultsThelinearrangeofpuerarinethodisreliable,accurateandspecific.ItcanbeusedforthequalitycontrolofYiqijiangtangcaps

3、ule.KeyonsilTM十八烷基键合硅胶柱(200mm×4.6mm,5μm)；柱温为35℃；流动相为甲醇0.5％醋酸（体积比17∶83），流速1.0mL/min；检测波长为250nm；进样量为10μL。理论塔板数以葛根素计不得小于5000,.freelg，置10mL量瓶中，加体积分数为30％的乙醇溶解并定容，即得质量浓度为1.337mg/mL的对照液，摇匀。精密吸取上述对照液1mL置10mL量瓶中，用体积分数为30％的乙醇稀释至刻度，即得质量浓度为133.7μg/mL的对照品母液。精密吸取上述对照品母液2mL置10mL量瓶中，用体积分数为30％的乙醇稀释至刻度，即得质量浓度为2

4、6.74μg/mL的对照品溶液。2.2.2供试品溶液的制备取本品内容物1g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精确加入体积分数为30％的乙醇20mL，称重，超声提取（功率250in，放冷，再次称重（用体积分数为30％的乙醇补足减失的重量），离心，倾出上清液，过滤得滤液。精确吸取该滤液10mL，水浴蒸干溶剂，残渣加水15mL使溶解，通过已处理好的D101大孔吸附树脂柱（1.5cm×8cm，顶端加入5g中性氧化铝，树脂层与氧化铝层用脱脂棉隔开），先以水150mL洗脱，再以体积分数为50％的乙醇150mL洗脱。收集乙醇洗脱液，水浴蒸干溶剂，残渣加体积分数为30％的乙醇溶解并定容于5mL量瓶

5、中，摇匀，以微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。2.2.3阴性样品溶液的制备按处方工艺取各味药材（缺葛根）制成空白样品，并按“2.2.2”项下制备阴性样品溶液。2.3测定方法分别吸取对照品溶液和供试品溶液、阴性样品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定。实验结果表明：阴性样品溶液在与对照品相应的保留时间处，无色谱峰出现，表明方中其余各药味对葛根素色谱峰测定无干扰。结果见图1。2.4线性关系考察分别精密吸取质量浓度为0.2674mg/mL的对照品溶液0.2、0.4、0.8、1、1.4、1.8、2mL于10mL量瓶中，用体积分数为30％的乙醇稀释至刻度，即得不同质量浓度的对照品溶液，分别精密吸取

6、10μL注入高效液相色谱仪中，测定峰面积，以峰面积（A）为纵坐标，相应的进样质量（m）为横坐标，绘制标准曲线，葛根素回归方程为A=4.8×106m+0.75×103，r＝0.9998，表明葛根素在0.0535～0.535μg质量范围内与峰面积呈良好线性关系。2.5精密度试验取质量浓度为26.74μg/mL的葛根素对照液10μL，重复进样6次，测得峰面积RSD为0.26％，表明仪器精密度良好。2.6稳定性试验取同一批供试品（批号：061205）溶液，分别0、2、4、6、8、10、12h进样，按上述色谱条件测定，计算葛根素含量，求得RSD为0.68％，表明样品中的葛根素在12h内测定结果

7、稳定。2.7重复性试验取同一批号益气降糖胶囊样品（批号061205）6份，按“2.2.2”制备溶液，进行测定，测得葛根素的平均含量为0.0288%，RSD为2.72％（n＝6）。2．8回收率试验取同一批号（批号061205）已知含量的益气降糖胶囊样品6份，每份约0.5g，精密称定，置20mL量瓶中，分别加入质量浓度为133.7μg/mL的葛根素对照品溶液1mL及适量体积分数为30％的乙醇，按“2.2.2”项方法操作，测定含量，并计算回收率。结果见表1。2.