反相高效液相色谱法测定定眩口服液中葛根素的含量

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1、反相高效液相色谱法测定定眩口服液中葛根素的含量作者：文洪宇，陈玲，谢安永，杨娟，夏泽蓉【关键词】定眩口服液;葛根素;反相高效液相色谱法　　［摘要］目的:研究定眩口服液质量控制方法。方法:采用反相高效液相色谱法测定定眩口服液中的葛根素含量，色谱柱:20RBAXExtenelC18柱（4.6mm×150mm，5μm），流动相:甲醇-水（24∶76），流速:1.0mL.min。结果:葛根素绝对进样量在0.16～0.96μg的范围内与峰面积呈良好的线性关系，y=4115.59x-42.84（r=0.9999），平均回收率为96.86%（RSD=1.84%

2、，n=6）。结论:该质量控制方法可行。　　［关键词］定眩口服液;葛根素;反相高效液相色谱法　　DeterminationofpuerarininDingxuanoralliquor　　Abstract］Objective:ToestablishanRP-HPLCmethodtocontrolthequalityofDingxuanoralliquor.Methods:Thechromatographicsystemconsistedofa20RBAXExtenelC18column（4.6mm×150mm，5μm）asanalyticalcolu

3、mnandmethanol-obilephaseL.min.Results:ThelinearrangesofPuerarinethodcanbeusedforqualitycontrolinproductionofDingxuanoralliquor.　　［KeyL.瓶）由本院自制，药材由重庆市中药材公司提供，并经本院张陈炎主任中药师鉴定;试剂:含量测定中甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。　　2方法和结果　　　　2.1色谱条件　　色谱柱:20RBAXExtenelC18柱（4.6mm×150mm，5μm）;流动相:甲醇-水（24∶76）;检测波

4、长:250nm;柱温:30℃;流速:1.0mL.min;分离度:2.0;理论板数以葛根素峰计算应不低于4000。　　2.2溶液配制　　2.2.1对照品溶液的配制精密称取葛根素对照品10mg，置25mL容量瓶中，加30%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取2mL，置10mL容量瓶中，加30%乙醇至刻度，摇匀，经0.45μm滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得每毫升含葛根素0.08mg的对照品溶液。　　2.2.2供试品溶液的配制精密吸取定眩口服液0.5mL，置蒸发皿中水浴蒸干，残渣加30%乙醇溶解并转移至50mL容量瓶中，加30%乙醇至刻度，摇匀，经

5、0.45μm滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得供试品溶液。　　2.2.3药材对照品溶液的配制取过三号筛的野葛粉末0.1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入30%乙醇50mL，称定重量，加热回流30min，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，再经0.45μm滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得药材对照品溶液。　　2.2.3空白对照品溶液的配制同样品定眩口服液制备方法制备缺野葛的空白样品，按“供试品溶液的配制”方法制备空白对照品溶液。　　2.3方法可行性考察分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、空白对照品溶液各10μL，注入液

6、相色谱仪，结果样品中葛根素出峰时间约为6.6min，空白对照在葛根素出峰时间无色谱峰出现，表明样品中其他物质对葛根素测定无干扰。色谱图见图1。　　a.葛根素对照品b.定眩口服液供试品c.定眩口服液缺野葛空白样品　　图1色谱图（略）　　2.4线性关系考察　　分别精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10、12μL注入液相色谱仪，测定葛根素的峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为y=4115.59x-42.84（r=0.9999）。结果葛根素绝对进样量在0.16～0.96μg范围内与峰面积呈良好的线形关系。　　2.5精密度试验

7、　　精密吸取葛根素对照品溶液（0.08mg.mL）10μL，重复进样6次，测定葛根素峰面积，其RSD=0.33%，表明仪器精密度良好。　　2.6重现性试验　　取同一批定眩口服液样品（批号:051024），按拟定的含量测定方法，分别制备6份供试品溶液，各精密吸取10μL进样，测定葛根素峰面积，其RSD=1.69%，说明本方法重现性好。　　2.7加样回收率试验　　精密吸取同一批定眩口服液样品（批号:051024，葛根素含量4.97mg.mL）0.5mL共6份，再分别加入葛根素对照品3.0mg、2.0mg、1.0mg各2次，按拟定的含量测定方法同法制备

8、，分别精密吸取10μL，注入液相色谱仪，测定葛根素含量，计算回收率，结果见表1。以上6份平均回收率为96.86%，RSD为1.84%，表