反相高效液相色谱法测定蒲薏颗粒中咖啡酸含量

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1、反相高效液相色谱法测定蒲薏颗粒中咖啡酸含量作者：韩瑜，王爱民，王海军，王永林【摘要】　　目的建立测定蒲薏颗粒中咖啡酸含量的方法。方法色谱柱LichrospherC18（4.6mm×250mm，5μm），以乙腈-水-磷酸（7∶100∶0.1）为流动相，检测波长：323nm,柱温：40℃,流速：1min·ml-1。结果咖啡酸在0.0053～0.848mg·ml-1范围内线性关系良好(r=0.9999)；平均加样回收率为97.75%，RSD=2.88%。结论该方法操作简便，结果准确，适用于蒲薏颗粒中咖啡酸的含量测定。【关键

2、词】咖啡酸蒲薏颗粒反相高效液相色谱　　蒲薏颗粒是由蒲公英、生薏苡仁、生何首乌、灵芝、三棱组成的复方制剂，具有清热解毒、活血化瘀、补益气血之功效。用于消化道肿瘤的放疗、化疗的辅助治疗，临床适宜病证见皮肤红斑、色素沉着、脱发、恶心、呕吐、口舌生疮、精神疲惫、面色无华，舌红偏紫，舌苔薄腻，脉弦细数等热毒炽盛、血行瘀滞、气血不足者，也可用于消化道肿瘤非放、化疗时而见上述证情者。蒲公英为蒲薏颗粒中的主药，而《中国药典》2000年版收载的蒲公英含量测定指标成分为咖啡酸。为控制产品质量，我们对制剂中咖啡酸的含量测定方法进行了研究。

3、　　1仪器与试药　　1.1仪器高效液相色谱仪系统（岛津LC-10Avp），包含2台LC-10ATvp泵；SPD-10Avp紫外检测器，7725i手动进样阀，TC-100柱温箱（天津特纳科技公司），L色谱工作站（广西威玛龙色谱科技公司）；超声波清洗器（250ETTLERAE240电子天平［梅特勒-脱利多仪器（上海）有限公司］等。　　1.2试药　　咖啡酸对照品购自中国药品生物制品检定所（批号：885-200102；规格：供含量测定用）。乙腈（色谱纯），甲醇、磷酸、氯仿等为分析纯。蒲薏颗粒由贵阳医学院药物研究所提供（批号：

4、20030306，20030310，20030312）。　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱为LichrospherC18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为乙腈-水-磷酸（7∶100∶0.1）；检测波长323nm［1］；柱温40℃；流速1.0mg·ml-1；进样量10μl；咖啡酸的保留时间(tR)约为25min。　　2.2对照品溶液的制备精密称取咖啡酸对照品10.60mg，置100ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，制得每毫升含0.1060mg的对照品储备液。　　2.3供试品溶液的制备取装量差异项下的

5、样品，研细，取约2.0g，精密称定，精密加水25ml，超声处理（250in，摇匀，离心，取上清液5ml置干燥的离心试管中，加氯仿5ml，密塞，漩涡混合5min，离心，取上清液用滤膜（0.45μm）滤过，即得。　　2.4阴性溶液的制备按处方比例和生产方法制成缺蒲公英的样品，按“2.3”项下供试品溶液的制备方法制成阴性溶液。　　2.5干扰性实验分别取咖啡酸对照品溶液、制剂供试品溶液及缺蒲公英药材的阴性对照液各10μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，结果供试品色谱与对照品色谱相应的保留时间处有吸收峰，而阴性溶液无吸收峰

6、，说明阴性无干扰。见图1。　　　2.6线性关系考察精密吸取上述咖啡酸对照品储备液0.5，1，2，4，8ml分别置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得系列对照品工作液。分别精密吸取上述系列对照品工作液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱，以峰面积Y为纵坐标，进样浓度X（mg·ml-1）为横坐标，得回归方程为Y＝44000097X-25772，r=0.9999，在0.0053～0.848mg·ml-1范围内，进样浓度与峰面积呈良好的线性关系。　　2.7精密度实验精密吸取咖啡酸对照品溶液（0.01060mg·ml-1

7、）10μl注入色谱仪，重复进样5次，测定咖啡酸，结果咖啡酸平均峰面积为438974，RSD为1.47%。　　2.8稳定性实验取同一供试品溶液10μl，分别于0，1，2，4，8h进样测定峰面积，结果供试品溶液中咖啡酸在4h内稳定不变。　　2.9重复性实验取同一批号样品供试品，按供试品溶液制备方法制备5份供试品溶液，分别进样测定，结果样品中咖啡酸的平均含量为0.0952mg·g-1，RSD为2.81%。　　2.10回收率实验采用加样回收法。精密称取已测定含量的同一批样品（平均含量0.0952mg·g-1）5份，精密加入咖

8、啡酸对照品适量，按制剂供试品溶液制备方法制备5份供试液，分别进样10μl。结果见表1。表1制剂供试品中咖啡酸的回收率实验（略）　　　2.11样品的测定分别精密吸取咖啡酸对照品溶液和供试品溶液适量，经0.45μm微膜过滤，分别进样10μl，测定，计算蒲薏颗粒中咖啡酸的含量。结果见表2。表2蒲薏颗粒咖啡酸的含量测定结果（略）　　　3讨论　　3.1供