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1、高效液相色谱法测定利咽颗粒中绿原酸的含量【关键词】高效液相色谱法；利咽颗粒；绿原酸；含量测定Abstract：ObjectiveToestablishaHPLCmethodfordeterminationofChlorogenicacidinLiyanGranule.MethodThedeterminationedonDiamondsilCl8(4.6mm×150mm,5μm)obilephaseconsistedofacetonitrile-0.4%phosphonicacidsolution(13∶87)atafloL/min.Thedetective.Re
2、sultThelinearrangeofChlorogenicacidethodissimple,accurateandule.Keyination利咽颗粒由金银花、玄参、薄荷(油)、桔梗等9味中药组成,具有宣肺利咽、清热解毒之功效。金银花为处方中的君药,用量最大,其主要成分为绿原酸。测定绿原酸的含量能够反映和控制该制剂的内在质量[1-3]。本试验采用高效液相色谱(HPLC)法测定利咽颗粒中绿原酸的含量,方法快速简便、稳定可靠、专属性强,为控制利咽颗粒的质量标准提供了可借鉴的依据。 1仪器与试药 岛津LC-10A高效液相色谱仪,岛津SPD-10A紫外检测器,
3、KQ-250DB型数控超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)。绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号753-200413,供含量测定用)；利咽颗粒(杭州华东医药集团生产,批号080801、080802、080803)。磷酸为分析纯,甲醇和乙腈为色谱纯,水为重蒸水。 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱：DiamondsilCl8(4.6mm×150mm,5μm)；流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)；流速：1.0mL/min；检测波长：327nm；柱温：室温。进样量：10μL。在此色谱条件下,绿原酸的保留时间约8min,理论塔板数按绿原酸计算均不低
4、于2000。 2.2溶液的制备 2.2.1对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品约5.2mg,置100mL量瓶中,加50%甲醇适量,超声波处理l0min,再加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,微孔滤膜(0.45μm)滤过,即得。 2.2.2供试品溶液的制备 精密称取本品约0.5g,置于50mL量瓶中,加入50%甲醇至刻度,密塞,称定重量,放置4h(避光),超声(250in,放冷,称重,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,即得。 2.2.3阴性对照溶液的制备 按样品处方量制备不含金银花药材的利咽颗粒,按“2.2
5、.2”项下方法制备阴性对照溶液。 精密吸取对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL,置10mL量瓶中,以50%甲醇稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取上述稀释液及对照品溶液10μL,在上述色谱条件下依法测定峰面积,以峰面积为纵坐标,绿原酸对照品进样量为横坐标,得回归方程：Y＝12637.79X－2.74,r＝0.9999(n＝6),结果表明,绿原酸进样量在0.026～0.26μg范围内具有良好的线性关系。 2.5精密度试验精密吸取对照品溶液(0.052mg/mL)10μL,连续进样6次,记录峰面积,RSD＝0.55%(n＝6),结果表明精密度良
6、好。 2.6稳定性试验精密吸取同一供试品溶液10μL,l2h内每隔一定时间测定1次,记录峰面积,RSD＝1.09%(n＝6),表明供试品溶液在室温条件下12h内稳定。 2.7重复性试验取同批样品5份,分别依法平行操作,测定每份样品中绿原酸含量,结果平均值为0.278mg/g,RSD＝1.57%(n＝5),表明本法重复性良好。 2.8加样回收率试验精密量取已知含量的同一批样品6份,精密加入一定量的绿原酸对照品,按本法进行含量测定并计算回收率,平均回收率为101.84%,RSD＝0.48%(n＝6)。结果见表1。表1加样回收率试验结果(略) 2.9样品含量测
7、定 取3批样品,分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各l0μL,按上述色谱条件测定,每批样品平行测定3次,按外标法计算绿原酸的含量,结果见表2。表2样品含量测定结果(略) 3讨论绿原酸为含有羟基和邻二酚羟基的弱有机酸,易溶于水和甲醇。由于样品中其他成分的互相影响,在供试液制备时,曾分别用了2种不同溶剂进行考察：以甲醇为溶剂,溶液出现混浊,沉淀较多；以50%甲醇溶液为溶剂,溶液澄清均一,操作既简单直接,又可保证待测成分不损失,结果精密度较为满意,故采用50%甲醇溶液为本试验供试液制备的溶剂。当流动相的配比为乙腈-0.4
8、%磷酸(13∶87)时,
