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1、高效液相色谱法测定热毒平颗粒中绿原酸的含量论文.freelm×4.6mm,5μm)；流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液(10∶90),流速为1.0mL/min,检测波长为327nm。结果绿原酸的检测浓度在0.0848～0.848μg范围内与峰面积呈良好线性关系(r＝0.9999)；平均回收率为102.60%,RSD＝1.69%(n＝6)。结论本法简便、快速,可用于热毒平颗粒的质量控制。【关键词】热毒平颗粒；绿原酸；高效液相色谱法；含量测定Abstract：ObjectiveToestablishanHPLCmethodforthedeterminationofChlorogenicacid
2、inRedupingKeli.MethodsThedeterminationedbyHPLCusinganYMCODS-Acolumn(150mm×4.6mm,5μm),obilephaseconsistedofacetonitrile-0.2%H3PO4solution(10∶90)atafloL/minandadetection.ResultsThecalibrationcurveforChlorogenicacidg/mL(r＝0.9999).Theaveragerecoveryethodissimple,rapidandapplicableforthequalitycontrol
3、ofRedupingKeli.Keyination热毒平颗粒由金银花、生石膏、玄参、地黄等中药制成,.freelm×4.6mm,5μm)；流动相：乙腈-0.2%磷酸水溶液(10∶90)；流速：1.0mL/min；柱温：室温；检测波长：327nm；进样量：10μL。理论板数按绿原酸峰计应不低于3000,分离度＞1.5。色谱图见图1。2.2溶液的制备2.2.1对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品4.24mg,置于50mL量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,配成浓度为0.0848mg/mL的对照品储备溶液,10℃以下保存。再精密量取4mL置10mL量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,
4、制成含绿原酸0.0339mg/mL的对照品溶液。2.2.2供试品溶液的制备取本品7g,精密称定,研细,混匀,取约0.5g,精密称定,放入具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇25mL,称定重量,密塞,超声处理(功率250in,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,以0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液。2.2.3阴性对照溶液的制备按处方取除金银花的各味药材,按制法制得样品,再按“2.2.2”项下方法,制得阴性对照溶液。2.3标准曲线的建立精密吸取绿原酸浓度为0.0848mg/mL的对照品储备溶液1、2、4、8、10mL,置10mL量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,
5、在上述色谱条件下测定,以峰面积对浓度进行线性回归,得回归方程为：Y＝55799416X－28478.3(r＝0.9999)。结果表明,绿原酸检测浓度在0.0848～0.848μg范围内与峰面积呈良好线性关系。2.4精密度试验精密吸取对照品溶液10μL,按上述色谱条件重复进样6次,测定峰面积。结果RSD＝0.52%,表明本方法精密度良好。2.5稳定性试验取同一批号(0602001)样品,按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件分别在0、1、2、4、6、8h进样,测定绿原酸峰面积。结果RSD＝0.64%,表明供试品溶液在8h之内稳定。2.6重复性试验取同一批号(0602001
6、)样品精密称取0.5g,共6份,按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件测定每份样品中绿原酸含量。结果绿原酸的平均含量为1.190mg/g,RSD＝0.88%,表明方法重复性良好。2.7加样回收率试验精密称取绿原酸对照品适量,配制成0.0124mg/mL的对照品储备溶液,取同一批号(0602001)样品,研细,混匀,取0.25g,精密称定,共6份,精密加入绿原酸对照品储备溶液各25mL,按照“2.2.2”项下方法制得供回收率用供试品溶液,按上述色谱条件测定,计算回收率。结果平均回收率为102.60%,RSD＝1.69%。结果见表1。表1加样回收率试验结果(略)2.8样品含
7、量测定取本品3批,按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件进行测定,结果见表2。表2样品中绿原酸含量测定结果(略)3讨论取绿原酸对照品的甲醇溶液,在190～650nm波长范围进行扫描,在327nm波长处有较大吸收,与2005年版《中华人民共和国药典》中金银花的测定波长一致,故测定波长选定为327nm。以多种比例乙腈-0.2%磷酸溶液(15∶85、13∶87、10∶90)试验选择流动相3-5,当比例为10∶90时,绿原
