高效液相色谱法测定消炎退热颗粒中咖啡酸的含量论文

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1、高效液相色谱法测定消炎退热颗粒中咖啡酸的含量论文方建和，熊胜泉，颜冬梅，朱卫丰【摘要】目的采用高效液相色谱法测定消炎退热颗粒中咖啡酸的含量。方法十八烷基硅烷键合硅胶柱（Alltima,.freel,4.6mm×250mm）；流动相：乙腈-0.4%磷酸（13∶87）；检测波长323nm。结果咖啡酸进样量在0.0387～0.3870μg范围内线性关系良好；r=0.9998（n=6），平均加样回收率为100.56%（n=6）；精密度RSD=1.36%（n=6）。结论该方法操作简便、快速、准确。【关键词

2、】高效液相色谱法；消炎退热颗粒；咖啡酸Abstract：ObjectiveToestablishanHPLCmethodfordeterminationofCaffeicacidinXiaoyanTuireGranule.MethodsTheseparationn(AIltima,5μm，4.6mm×250mm)obilephaseofAcetonitrile-0.4%Phosphoricacid(13∶87)anddetection.ResultsTheCaffeicacidsamplessh

3、opleethodprecisionethodissimple,availableandaccurateKeyaC18(5μm，4.6mm×250mm)；乙腈0.4%磷酸（13∶87），检测波长323nm，流速1.0ml/min，柱温30℃。进样量20μl。2.2对照品溶液的制备精密称取咖啡酸对照品适量，加甲醇制成每毫升中含8μg的对照品溶液，避光保存，即得。2.3供试品溶液的制备取装量差异项下［5］的本品，研细，取约1g，精密称定，加入50%甲醇10ml，称定重量，超声处理（频率40kHz，

4、功率250in，放冷至室温，用50%的甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，取上清液过0.45μm的微孔滤膜，取续滤液至棕色瓶中，避光保存，即得。2.4阴性对照实验取按处方及工艺制备的不含蒲公英原药材的样品，按供试品溶液的制备试验，结果在咖啡酸的峰位上未出现色谱峰，说明阴性对照无干扰。见图1。2.5线性关系的考察精密称取咖啡酸对照品9.675mg置500ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，从中分别精密吸取1，2，4，6，8，10ml至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，再从中分别精密吸取20μ

5、l注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积。结果见表1。表1线性范围考察结果（略）并以峰面积值A对进样量C进行回归，得标准曲线方程为A=3160809C-5033，r=0.9998。以峰面积值A为纵坐标，进样量C为横坐标作图，得一直线。结果表明，咖啡酸在0.0387～0.3870μg内，样品进样量与峰面积线性关系良好。2.6精密度实验精密吸取对照品溶液（0.00851mg/g）20μl，连续进样6次，测定峰面积值。结果见表2。表2精密度实验（略）2.7重现性实验取同一批样品6份，按上述的方法分别

6、制备供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，照前述色谱条件测定，结果见表3，实验结果表明，该法重现性良好。表3重现性实验结果（略）2.8回收率实验精密称取已知含量的消炎退热颗粒［批号20050201，含量0.369mg/袋（规格：5g/袋）］适量，精密加入一定量的咖啡酸对照品，按质量标准中含量测定方法测定，计算回收率。结果见表4。表4咖啡酸回收率实验结果（略）2.9样品测定实验按上述测定方法分别测定10批样品。结果见表5。表5成品中咖啡酸含量测定结果（略）结果表明，各批次消

7、炎退热颗粒中的咖啡酸含量稳定。3讨论蒲公英是常用的清热解毒中药，用于咽喉肿痛（急性扁桃体炎）疮疖，乳痈发热，也可用于热淋；现代药学及药理研究表明，蒲公英所含的绿原酸和咖啡酸具有广谱抗菌和消炎利胆作用。体外试验表明，蒲公英对金黄色葡萄球菌、变形杆菌、甲型链球菌、乙型链球菌均有明显的抑菌作用。因此，本研究将咖啡酸作为消炎退热颗粒质量控制的指标是可行的。在本次研究中我们首先参照《中国药典》测定本方大青叶中靛玉红成分的含量，因为本品工艺为水提醇沉工艺，靛玉红含量非常低（只有千万分之四），因此测定其含量意

8、义不大。后改采用高效液相色谱法测定方中蒲公英中的咖啡酸的含量。为保证产品质量的均一性和临床用药的安全性及有效性，在对消炎退热颗粒质量研究的基础上建立了消炎退热颗粒中咖啡酸的含量测定方法。对于在该品种的质量控制中建立以蒲公英中咖啡酸为含量测定指标的研究，未见文献资料报道。研究结果表明，该法方便、快速、准确，为制剂的质量控制提供了实验依据，可用于消炎退热颗粒的质量标准和质量控制，为全面控制产品质量提供了方法。实验中发现磷酸的浓度对咖啡酸的峰形影响较大，0.1%的磷酸使主峰拖尾因子大于2.0。不同浓度