丁酸钠诱导raji细胞基因表达的变化

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1、丁酸钠诱导Raji细胞基因表达的变化作者：张海涛伍俊汪亚君郭黠冯哲玲梁念慈朱振宇马涧泉【摘要】目的分析丁酸钠诱导Raji细胞的基因表达变化，探讨丁酸钠诱导凋亡作用机制。方法限制性显示PCR技术(RestrictionDisplayPCR，RDPCR)分析基因表达变化，利用互联网提供的GenBank核酸数据库分析比对获得的差异表达序列。结果获得14条差异表达序列，其中6条是对照组高表达序列，8条是实验组高表达序列。结论采用RDPCR技术可以快速简便地分析药物诱导基因表达变化。分析表达差异的序列发现，丁酸钠可诱导促进细胞凋亡的基因表达，降低

2、肿瘤细胞高表达的基因表达。【关键词】限制性显示PCR技术；丁酸钠；凋亡；基因表达　　ChangeofGeneExpressioninRajiCellsInducedbySodiumButyrate　　　　Abstract：ObjectiveThisstudyechanismofapoptosisinducedbysodiumbutyrate.MethodsThechangeofgeneexpressionbutyrate.ConclusionThechangeofgeneexpressioninducedbydrugscouldbeanal

3、yzedbyRDPCRmethodsquicklyandsimply.Geneexpressionthatpromptedcellapoptosisbutyrateorcellsbutyrate；Apoptosis；Geneexpression　　0引言　　Raji细胞是悬浮状态生长的，但我们前期研究发现Raji细胞在丁酸钠的处理下可由悬浮生长状态转变为贴壁生长状态，伴随有细胞凋亡现象的发生[1]。我们研究小组拟通过RDPCR显示mRNA表达差异来揭示丁酸钠诱导Raji细胞凋亡时基因表达的变化，试图寻找造成细胞发生形态学变化的主要基因，

4、探讨丁酸钠作用的可能机制。　　1材料和方法　　1.1主要试剂丁酸钠(SB)，溴化乙锭（Sigma公司）；DNA回收试剂盒（QIAquickGelExtractionKitProtocol，德国QIAGEN公司）；mRNA纯化试剂盒（OmegaBiotek公司），限制性内切酶Sau3AI，DNA连接试剂盒，LATag酶，RNasin，T4DNA连接酶，dNTP，PMD18TVector，JM109细菌（大连宝生物公司）；丙烯酰胺，N，N’–甲叉双丙烯酰胺，琼脂粉，琼脂糖，Tag酶，低熔点琼脂糖（上海生物工程公司）；胰蛋白胨，酵母提取物(英

5、国OXIOD公司)；Tris饱和酚（鼎国生物工程公司）；逆转录酶，TRIzol试剂，DEPC（Invitrogen公司）；RPMI1640（Gibco公司）；小牛血清（杭州四季青公司）；100bpDNALadder（Bebco公司）；氯仿，异丙醇（国产分析纯）。　　1.2细胞培养Raji细胞株(来源于中山大学肿瘤防治中心)以含10%小牛血清的RPMI1640培养液于5%CO2中培养。　　1.3细胞mRNA的提取将生长状况良好的Raji细胞接种在6孔培养板中，细胞浓度为1.0×106/ml，加入3mmol/L丁酸钠，37℃、5%CO2培养。总

6、RNA的提取按照Invitrogen公司提供的TRIzol试剂说明书进行操作。最后加30μlDEPC处理水溶解总RNA。参照mRNA纯化试剂盒说明书（OmegaBiotek公司）操作，从总RNA中纯化mRNA。　　1.4从mRNA反转录成为cDNA及双链cDNA末端平滑化逆转录按照Invitrogen公司的说明书进行逆转录，mRNA约2μg，dNTP0.5mmol/L，OligdT150.1μmol/L，65℃，5min，加MMLV200U和酶反应缓冲液，37℃延伸时间75min。cDNA样品20μl，70℃，10min。加入5μlT4

7、DNAPolymerase，5μl10×T4DNAPolymeraseBuffer，5μl0.1%BSA，3.5μl2.5mmol/LdNTP，12.5μl灭菌水，轻柔混匀。37℃反应5min。加入25μlEDTA(pH8.0)和25μl10%的SDS，轻柔混匀，停止反应。加入100μl酚/氯仿溶液，振荡，混匀。10000g离心1min，液相分离，将上层水相转移至另一微量离心管中。加入1/10体积3mol/LNaAc（pH5.2）、2.5倍体积预冷的无水乙醇，混匀。-20℃，静置30min。4℃离心13000g×10min，弃上清，75%乙

8、醇洗沉淀1～2次，晾干。　　1.5cDNA的酶切cDNA溶于20μl水中，定量后，取大约2μg进行酶切反应。16USau3AI，37℃进行酶切反应，时间不少于2h。　　1.6接头