对硫磷诱导果蝇细胞的基因表达谱及差异表达基因与抗性的关系研究

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2、ｎ峨麵齡沪象謬曲￥際自誦議岡窜‘－；＾巧武雜：餐＾《某編額篡選議農處藝論測ｉｉｐ＾ｌｔｉ議圓雪議？学位论文独创巧声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果。本论文中除引文外，所有实验、数据和有关材料均是真实的。本论文中除引文和致谢的内容外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究所做的贡献均已在论文中作了声明并表示了谢意。言（＾学位论文作者签名；巧！曰期：＞／５年＾司０学位论文使用授权声明研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属南京师范

3、大学。学校有权保存本学位论文的电子和纸质文档，可Ｗ借阅或上网公布本学位论文的部分或全部内容，可采用影印、复印等手段保存、汇编本学位论文，。学校可Ｗ向国家有关机关或机构送交论文的电子和纸质文档允许论文被查阅和借阅。（保密论文在解密后遵守此规定）：，密级：密保密论文注释本学位论文属于保密论文保期限为年。学位论文作者签名：指导教师签名；■日期；７〇｜Ｓ日期；年巧矜日＞＜＞摘要摘要一，对硫憐因其毒性强有机憐农药是世界上生产和使用较多的农药品种之，作用时间短而被广泛使用。长期大量不合理使用使害虫对其产生抗药性，

4、但目前对对硫憐的应激作用机理并不十分清楚。本实验在基因组水平上研巧对硫稱的应激作用机制及其作用郎标。ｒｔ－－２Ｃｌｉｎ８（Ｃ８）Ｗ果陶的Ｓ细胞为模式细胞，利用ｅｌＣｏｕｇ０ＣＫ试剂盒和细胞计数板检测对硫憐诱导细胞的毒性及细胞存活率；通过数字基因表达谱和实时巧光定ＰＣＲＲＴ－ＰＣＲ）检量（ｑ测对硫憐药物处理细胞和正常细胞的基因表达差异，筛选与ＣＣＫ－８对硫磯应激相关的基因。通过多次试剂盒和细胞计数实验检测细施毒性，结果表明３５＾ｉｇ／ｍＬ（ｐｐｍ）对硫鱗处理细胞的死亡率最小。数字基因表达谱检测３５９９〇１对硫稱浓度处理

5、细胞和对照组细胞（只加溶剂甲醇处理的细胞和什么都不加的正常细胞）的基因表达差异，结果显示，对硫憐处理细胞中有５３４个基因的表达量发生较明湿的变化。其中细胞色素Ｐ４５０的句取＜５姑和〇巧知２基因的表达量分别提高３．３４倍和２．０４如办－倍，基因ＣＷ、砂公如Ｓ、砂如八〇４出现特异性表出说Ｔ类中有ＧＳ７聯基因一种气味结合蛋白０如转运蛋白表达上调２倍，出现特异性表达；ＪＷＦ拍和ＣＧ５３２／基因的表达量均提离大约２．５倍。但五种ＮＡＤＨ类基因：Ｗ）３、ｉＶＺ＞￥、Ｍ）５、２？３１１Ｍ）６、的表达量却被下调了．倍。许多氧化还原酶类的脱氨酶也出

6、现了不同程度的差异表达。从差异表达的基因中筛选出８个差异表达倍数相对较大的基因做ｑＲＴ－ＰＣＲ验证数字基因表达谱的可靠性，同时验证耐药性浓度筛选的正确性。结果表明巧光定量结一Ｋ－果与基因表达谱的分析结果致，ＣＣ８试剂盒筛选的耐药性浓度与巧光定量的检一致测结果也。为了验证高水平表达的基因与解毒反应的相关性，本研巧作了过表达验证，将筛选出来的两个离水平表达基因饼抑始和说Ｔ说转染Ｓ２细胞使其过表达，再用对硫憐处理并检测细胞的毒性。结果显示，佛抑如和ＧＣＴＥ６的过表达使细胞对对硫憐的耐药性明显増强。一＾＾Ｌｔ结果表明，昆虫对对硫

7、憐的抗药性是由相关基因控制的，些基因的表达上一调、下调或特异性表达会影响细胞的耐药性水平。本结果为进步研巧昆虫对对硫磯的抗性作用机制Ｗ及筛选新的作用飽标提供了实验依据。Ｔ－ＰＣＲ关键词：对硫磯，果蜗细胞，昆虫抗药化数字基因表达敵ｑＲＩＡｂｓｔｒａｃｔＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｇｅｎｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ虹ｔｈｅｐａｒａｔｈｉｏｎ山ｄｕｅ化ｌｅＤｒｏｓｏｐｈｉｌａｃｅｌｌｓａｎｄｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｒｅｓｓｅｄｐｇｅｎｅｓｔｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅＡｂｓｔｒａ

8、ｃｔＯｒｇａｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｐｅｓｔｉｃｉｄｅｉｓ